• Santé - Enzyme, Lavage, Activite enzymatique, Protéine

[Immunologie] immunoblote

Tu dépose l'échantillon protéique sur SDS-PAGE après migration tu fait agir l'anticorps dirigé spécifiquement contre la proteine que tu veux détecter. Cette anticorps est couplé à une enzyme ou un fluorochrome comme sa après lavage si tu detectes l'activité enzymatique ou la fluorescence sa veux dire que l'anticorps est présent est donc que le protéine est présente.  [...] Pour le western c'est un transfert électrique des protéines alors que l'immunoblot c'est un transfert qui se fait sous vide de pression.  [...]

Biochimie : activité enzymatique

1) Sachant que 1ml de préparation enzymatique a été déposée sur la colonne et qu'un prélèvement de celle-ci (50µL) a été dosé dans un volume réactionnel de 3ml (Do/Min=0,267), calculer les activités totales. déposés puis éluées avec le lavage et en présence de compétiteur.  [...] 2) L'activité de chaque fraction (0,5ml) a été dosé à partir de 20µL de prélèvement dans un Volume réactionnel de 1mL(Volume final), quel est le rendement de la chromatographie.  [...]

[Biochimie] B-Galactosidase d'origine vegetale

1- Comment je peux s'avoire les tempons utilisé pour les différent étape. tompon de la réaction enzymatique, tompon d'extraction et tempon de chargement et de lavage pour chromatographie DEAE.  [...] 2- dosage de protéine et courbe standard par méthode de lowry et la méthode d'estimation de la consentration en protéines par mesure d'absorbance en UV.  [...]

Test ELISA ??

On incube et on fait un lavage, on ajoute un 2 eme anticorps marqué donc anticorps anti anticorps marqué. Incubation lavage. On ajout des substrat coloré, et ceux ci vont réagir avec l'enzyme on obtiendra un produit coloré, qu on mesura la densité optique.  [...] D'autres techniques existent. si le récepteur est effectivement taggé, suivant les propriété de ce marquage, il est possible lorsqu'il y a interaction avec l'anticorps secondaire via le primaire, d'exciter le marqueur du récepteur qui réémet de l'énergie vers l'anticorps II, lui-même couplé à un fluorophore.   [...]

Probème de smear sur gel d'électrophorèse de protéines

La protéine d'intérêt fusionnée en N-terminal à la GST a été exprimée chez E. coli puis purifiée sur résine cobalt (lavage en batch). La protéine de fusion a été clivée à la thrombine. La protéine d'intérêt est éluée par simple centrifugation. La protéine de fusion toujours accrochée à la résine est éluée avec de l'imidazole.  [...] Ok, donc si vous êtes sûr que votre protéine d'intéret est bien produite. Les smears sont en géneral dûs á une mauvaise préparation d'un des deux gels (ou des deux) ou encore au dépot d'un volume trop grop de protéines dans les puits du gel.  [...]

[Biologie Cellulaire] Phagocytose - influence de la température?

Je suis étudiante en Génie Biologique et au cours d'un TP de Culture Cellulaire Animale on a mesure l'activité de phagocytose des macrophages péritoneaux de souris (auquelles on avait injecté 1mL de solution de poly-peptone à 1O% trois jours avant le lavage).  [...] Il est admis qu'il existe pour tout organisme ou molécule enzymatique des optimum d'activité, qui sont des températures idéales pour lesquelles des organismes ou des enzymes fonctionnent mieux. C'est l'exemple des spermatozoides et des ovogonies qui se portent mieux à 33°C, ou des levures boulangères qui sont actives quand il fait chaud.  [...]

HPLC sur des protéines déjà dénaturées

Je m'explique. J'ai marqué ma protéine avec une sonde fluorescente. Dans le processus, la protéine est dénaturée (c'est voulu). Je souhaite ensuite savoir combien (en pourcentage) de protéines j'ai marqué.  [...] Je n'utilise pas de SDS car on fait de la MS derrière et cela peut être galère, mais je me méfierais tout de même. L'interaction protéine/SDS est tout de même assez forte. Je ne suis pas sûr que tu l'élimines totalement par simple lavage/dialyse. Il me semble que la méthode standard pour éliminer le SDS est de faire précipiter la protéine dans l'acetone.  [...]

Résultats | Dossier

Pour la suite des manipulations, à savoir l'étude de liaison et la mesure de l'activité enzymatique, il est nécessaire de travailler sur une enzyme purifiée. Ceci a été effectué par chromatographie échangeuse d' ions sur une colonne DEAE-Sephacel.  [...] Afin de confirmer l'action inhibitrice du CED-28 sur la protéine kinase C et une absence d'activité des trois autres molécules sur l'enzyme, nous avons cherché à voir quelle influence pouvait avoir ces composés sur la tanslocation de la PKC du cytoplasme vers la membrane plasmique.  [...]

[Biochimie] Concentré une protéine recombinante

Il me semble que l'on avait fait ça en TP pr concentrer une protéine recombinante (facteur de croissance) mais je ne me rappelle plus des tampons et du protocole.  [...] Sinon, tu pourrais aussi fixer ta prot sur une colonne (échangeuse d'ions par exemple). Comme ça tu enlèves ton imidazole pendant le dépôt et le lavage, et tu concentres ta protéine pendant l'élution. Ca peut parfois être plus rapide que l'ultrafiltration.  [...]

[Biologie Moléculaire] optimisation ELISA

j effectue pour la premiere fois des Elisa et le protocole doit etre optimisé car il y a beaucoup de bruit de fond alors je teste differentes conditions notamment differentes concentrations pour mon antigenes et mes anticoprs (c'est en cours pas encore de resultats) mais j'aimerais aussi essayer differentes conditions pour le blocage mais j'ai pas d'idées grandioses alors si quelqu'un veut bien m'aider.   [...] pOUR L'ELISA que j'ai effectuer si je me souvien bien pour le blocking j'ai insister sur le lavage. les bruit fond peuvent étre dut a trois chose.  [...]