• Santé - Enzyme, ADN, Site

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

Chaque enzymes de restriction reconnaît une séquence d'ADN spécifique, il s'agit d'un site particulier qui sera clivé quand l'enzyme sera présente.  [...] Une coupure de l'ADN peut être engendré soit mécaniquement ou par des agents chimiques mais dans ce cas là on coupera l'ADN de façon aléatoire on ne pourra pas prédire l'endroit où ça va se casser tandis qu'avec une enzyme de restriction on coupe l'ADN à l'endroit où sera son site de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Erreur de taille sur SDS-PAGE

J'ai deux petits problèmes. Tout d'abord je voulais savoir qu'elle erreur de mesure on fait lorsque l'on détermine la taille d'un fragment d'ADN sur une gel de SDS-PAGE avec 1.5% d'agarose. Je précise un peu mon idée, lorsque l'on mesure un fragment de 300 pb c'est à plus ou moin 20 pb.  [...] Deuxièmement je voudrais savoir si il fallait un distance minimum de part et d'autre d'un site de restriction pour que l'enzyme clive le double brin d'ADN. Là aussi je précise mon idée. J'ai un site de restriction qui se trouve 71pb avant la fin du fragment d'ADN et je voudrais savoir si c'est possible que l'enzyme ne le vois pas.  [...]

carte de restriction

je ne comprends pas comment l'établir à partir de l'electrophorése d'adn digéré par une ou plusieurs enzymes de restriction.  [...] Commence par établir le nombre de site pour une enzyme en fonction du nombre de brin après digestion. Regarde aussi la taille de ton ADN et place un des site au nucléotide +1.  [...]

Nouvelle stratégie pour la thérapie génique

La méthode est basée sur un mécanisme communément utilisé par les bactériophages ( virus infectant des bactéries ). Une enzyme, l'intégrase permet de couper et d'insérer l' ADN phagique en un point spécifique à l'intérieur de l'ADN bactérien. Pour ce faire l'enzyme reconnaît une séquence sur l'ADN phagique appelée le site donneur attB et le lie à un site spécifique sur l'ADN bactérien le site receveur attB.  [...] L'équipe a injecté dans des souris modèles de l' hémophilie le gène codant pour le facteur de coagulation IX lié a une site attB. Au même moment certaines souris ont aussi reçu une injection de l'enzyme intégrase. Après une semaine les souris ayant reçu le traitement à l' intégrase ont montré une expression 12 fois plus importante du facteur IX, que les souris non traitées.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

la séquence de ton ADN doit être coupée des deux bords avec la même enzyme que tu utilise pour linéariser le vecteur..de plus, ton site de restriction doit être localisé sur un marqueur de séléction.  [...] 1- ma sequence d'adn doit etre coupe des 2 bords par la meme enzyme. Or je retrouve pas le meme site de restriction 2 fois dans ma sequence.  [...]

[Génétique] Mécanisme de transcription

ensuite le promoteur est une molécule qui permet le début de la transcription en permettant à l'enzyme de se fixer à l'adn et de reconnaitre le site d'initiation, d'où commencera la transcription.  [...] Je peux pas faire de dessin, mais imagine une schématisation de l'ADN (2 lignes horizontales paralléles), mets au 2ème quart une marque +1, qui est le site d'initiation de la transcription. En amont de ce +1, donc avant, soit sur le gauche, tu peux poser une position que tu note -10 et plus à gauche encore une position -35, ce qui correspond aux boites (ou unités de transcription) qu'on retrouve chez les procaryotes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagénèse dirigée qui ne fonctionne pas

3) Si mes primers les plus extrèmes contenant les sites de restriction uniques du plasmide ont leur séquence commençant directement par ces sites de restriction uniques, y a t-il trop de risques qu'ils soient modifiés (et donc que je perde mes sites de restriction) par une enzyme qui perdrait de sa fidélité justement là où je veux pas.  [...] La plus part des enzymes de restrictions ont besoin de quelques bases de part et d'autre du site pour se fixer a l'ADN si ton site est exactement a l'extremité de l'ADN beaucoup d'enzyme ne couperont pas du tout. ca va etre super galere.  [...]

Cristallisation des proteines

A quoi ca sert. savoir a quoi ressemble l'adn (Prix nobel de watson et Crick) et donc comprendre les bases moleculaires de la biologie, savoir a quoi ressemnle le site actif d'une enzyme, et donc etre en mesure de concevoir de facon rationnelle des petites molecules qui vont s'y lier -. medicaments,  [...] J'avais effectivement connaissance de l'experience de diffraction au rayon X pour découvrir la structure de l'ADN, mais je n'en avait pas compris le principe ^^.  [...]

Enzyme de restriction: petite difficulté avec sa définition

une enzyme de restriction reconnait un site (=une séquence) spécifique sur l'ADN et coupe de chaque coté de ce site. Si le site est à l'extrémité d'un brin d'ADN linéaire, alors elle peut couper.  [...] Ces séquences correspondent à ce qu'on appelle une séquence palindromique (qui se lit de manière identique dans les 2 sens). Cela veut dire que dans un grand flot de bases azotées allant de quelques bases à plusieurs centaines ou plusieurs milliers, dès que l'enzyme trouvera cette séquence enfouis dans le code génétique, elle la coupera de manière cohésive, c'est à dire en scindant le double brin en partant d'en haut à gauche entre le G et le A du 5'-3', fait sauter les liaisons entre les AATT complémentaires des 2 brins et finalement coupe encore entre le A et le G du 3'-5'.  [...]

[Microbiologie] Hybridation

Homing endonucleases do not have stringently-defined recognition sequences in the way that restriction enzymes do. That is, single base changes do not abolish cleavage but reduce its efficiency to variable extents. The precise boundary of required bases is generally not known.  [...] Non, cette enzyme a tendance à rester accrocher à son site de coupure. Le SDS va dénaturer l'enzyme, qui va donc se décrocher. Il faut donc l'ajouter après la digestion et avant la migration de l'ADN.  [...]