• Santé - Entrain, Vecteur, Protéine

ubiquitine et protéasome

Je t explique la manip. Enfait je suis entrain de créer le vecteur de clonage permettant de surexprimer la protéine permettant de capter une autre pour l'envoyer au protéasome. Est ce que tes inhibiteurs peuvent s utiliser sur des cellules S2+ Est ce que tu penses que si je transfecte ce vecteur dans ces cellules en presence d'inhibiteur et que je marque ma prot soit disant dégradée je pourrais par cette methode confirmer ou pas sa dégradation.  [...] Je t explique la manip. Enfait je suis entrain de créer le vecteur de clonage permettant de surexprimer la protéine permettant de capter une autre pour l'envoyer au protéasome. Est ce que tes inhibiteurs peuvent s utiliser sur des cellules S2+.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur pET15b et 19b

Je suis entrain de tenter de sur-exprimer des protéines chez les cellules BL21 DE3 et malheuresement ça ne surexprime pas... Le vecteur utilisé est le pET19b et en parcourant un peu la biblio je suis tombé sur un article où pour la surexpression de la même protéine le vecteur pET 15b a été utilisé.  [...] Bonjour, je ne sais pas si plus de 10 ans après quelqu'un va me répondre, mais. quelle est la fonction du site thrombine du vecteur pET15b Merci.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs intégratif+inductible

Oui je suis entrain de voir sa. Le pbi-EGFP m'a l'air d'être intéressant. Un vecteur retroviral serait le mieux, mais le plus souvent ils sont associés avec un un promoteur de type CMV trop fort, pour le moment j'ai pas trouvé de vecteur rétroviral inductible d'ailleurs je me demande même si sa existe.  [...] Enfête justement pour le moment je n'aie pas téstés ni la GFP ni le système inductible. Ce qui ne marche pas pour moi c'est un vecteur avec un promoteur non inductible et sans tag il contient un gène de resistance néo.  [...]

[Biochimie] L'activité d'une protéine

je suis entrain d'étudier un article scientifique dans lequel ils expliquent comment ils détermine l'activité d'une protéine. Ici on determine l'activité des recepteurs oestradiol en le complexant avec un His-tag. je voulais savoir si l'his-tag qui entraine une modification de conformation, peut changer le repliement de la protéine donc chnger l'activité de celle ci.  [...] Ben ça pourrait éventuellement. En général on ajoute une séquence de clivage entre la protéine et le tag histoire de l'éliminer après la purif si il pose problème.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Et je ne m'inquiéterai pas trop d'avoir des concatémères, tu utilises 2 enzymes qui font des sticky ends qui ne sont pas compatibles alors il est très peu probable que tu es des 2 inserts ligués en même temps dans ton pET45b. Si tu veux en être certain la meilleure technique est de faire une control digestion avec une enzyme qui est au milieu de ton insert et une enzyme qui est dans ton vecteur (pas au milieu sinon ça ne sert à rien).  [...] Je ne pense pas qu'il y ait problème au niveau du mix réactionnel (j'ai fait tout les calculs) mais plutôt au niveau des extrémités soit du vecteur soit des insert. Je suis entrain de tout reprendre et je ferai en sorte de lancer les ligations le plus rapidement possible.  [...]

[Biochimie] Test de fonctionnalité d'une protéine

Je travaille actuellement (enfin depuis un moment) sur une protéine capricieuse... J'ai dut la purifier en conditions dénaturantes et je suis actuellement entrain d'essayer de juger de l'efficacité de la renaturation.  [...] Afin d'obtenir plus d'informations j'ai voulu me baser sur un test fonctionnel car ma protéine est sensée dimériser avec une autre. J'ai tenté d'observer la dimérisation par tamis moléculaire, gel non-dénaturant et agents couplant mais rien n'y fait (sans doute que la dimérisation ne se produit que dans le milieu cellulaire après des modifications post-traductionnelles).  [...]

western-blot

je suis entrain de faire des western sur des mutants afin de voir la différence d expression d une protéine dans ces lignees. Or je suis obligé pour cela de précipiter mes protéines sinon je n ai pas les quantites suffisantes.  [...] L'autre solution est d'hybrider ta membrane avec un second anticorps. qui va reconnaitre une protéine témoin (style l'actine si bien sur la taille de ta protéine témoin n'est pas la même que celle de ta protéine d'intérêt).  [...]

Traitement de SIDA

Je suis entrain de lire le brevet. Je ne pas encore tout compris, mais en gros. - ils utilisent le champs magnétique et ensuite, ils ont trouvé la fréquence de résonance de virus (certains de ces protéines). En état de résonance le protéine est détruit et le virus - avec.  [...] De plus si effectivement il étais possible de détruire des protéines spécifiques avec ce genre de technique, il suffirait de trouver à chaque fois une protéine propre à une cible pour éradiquer tous les virus, la plupart des bactéries, les cellules cancéreuses etc etc.  [...]

surproduction et purification de proteine

je suis entrain de surproduire la topoisomerase topI de campylobacter jejuni grace a une induction a l 'itpg la je vais entamer ma purification j ai quelaue idees pour mon protocole mais est ce que y a des personnes qui ont deja fait de la purif de proteine j aimerai avoir un apercu pour precider ma purification c est par un his tag.  [...] * Harmonisée * admettons que chez jejuni, un codon précis de l'ARN de ta protéine d'intérêt soit très peu retrouvé dans tout le transcriptome de jejuni (exemple, j'invente, on parle du codon CUG qui est très peu utilisé pour coder une leucine). Eh bien tu ne vas pas choisir le meilleur codon leucine chez E.  [...]

[Immunologie] Immunoprecpitation: liaison de la resine protG avec l'anticorps qui marche pas

Bonjour tous le monde. Je suis entrain de faire la mise au point d'une IP. pour se faire j'ai voulu juste tester le rendement de la résine protG avec l'anticorps sans rajouter la protéine d'intérêt. la résine ne capte même pas le 1/10 de la quantité de l'anticorps de départ qui est de 1µg dans 500µl de PBS avec 50µl de la résine.  [...] Je laisse la résine en contacte avec l'anticorps toute la nuit puis après je lave 3 fois avec du PBS et j'élue finalement dans 50µl de glycine 2.5.   [...]