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[Biochimie] ARNm et résistance à la température

Est-ce que les ARNm résistent aux températures élevés de l'ordre de 90°-100°C En fait je teste un protocole de lyse cellulaire par congélation/décongélation pour extraire les ARN ensuite.  [...] Les cycles de congélation ne sont pas bons du tout pour les ARN. La congélation/décongélation/sonication c'est pour les protéines, pas pour les ARN.  [...]

[Biologie Cellulaire] Au secours : Pb à la décongélation de cellules

Ce sont uniquement les miennes qui ne repartent pas. Pourtant, j'ai suivi à la lettre le protocole de décongélation. décongélation rapide de l'ampoule à 37°C puis je mets les cellules dans 5ml de SVF pur, je centrifuge et je reprends dans du milieu RPMI (leur milieu de culture) et enfi je le mets à 37°C, 5% CO2.. Très peu avait adhéré le lendemain.  [...] Rien à redire sur le protocole de décongélation, c'est quasiment ce que je fais. Sans vouloir remettre en cause votre collègue, l'erreur est humaine et c'est peut être lors de la congélation qu'il y a eu un problème.  [...]

[Biochimie] Western blot eNOS

Votre congélation n'est peut être pas assez rapide. Ou alors c'est lors de la décongélation qu'il y a un problème. Mais peu importe si vous avez trouvé un protocole qui fonctionne.  [...] Les protéines phosphrylées sont classiquement plus sensibles que les protéines non modifiées. Vous pourriez également essayer d'ajouter des inhibiteurs de phosphatases mais a priori la congélation immédiate doit résoudre le problème.   [...]

[Biologie Cellulaire] Effets de la congélation

Le second avec un mélange 10% de DMSO 90% de SVF ainsi qu'une décongélation lente donnait 30% de cellules mortes. Avec le même mélange mais une décongélation rapide (et c'était le protocole classique de cette unité de l'INSERM), on avait 25% de pertes. La décongélation rapide est donc un avantage.  [...] Mais cette économie de DMSO n'était pas si profitable que ça (d'où le fait que l'INSERM ne l'utilisait pas). en effet, quand on observe le temps de doublement de la population cellulaire juste après décongélation, on s'aperçoit que ce temps est plus élevé avec seulement 1% de DMSO.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dmso

J'ai eu l'occasion de comparer des taux de survies cellulaires avec des cellules placées dans différentes conditions et on observait 25% de mortalité cellulaire avec un protocole classique (10% de DMSO dans le milieu de culture, décongélation rapide à 37°C), 30% de mortalité avec 10% de DMSO et une décongélation lente à température ambiante (20°C environ) et 20% de mortalité avec un mélange à 1% de DMSO et une décongélation rapide à 37°C.  [...] Mais comme dit dans le fil, un peu plus haut, le DMSO est toxique pour la cellule. Alors toute la nuit (généralement 16h), même à 4°C, cela a très probablement augmenter la mortalité cellulaire. Et les cellules encore vivantes vont probablement être empoisonné par les débris cellulaire lors de la décongélation.  [...]

Décongélation et ensemencement 3T3

C'est vrai que je ne les ai pas centrifugées après leur décongélation, le fournisseur ayant indiqué que ce n'était pas nécessaire, et que l'ajout de milieu frais permettait de neutraliser les effets cytotoxiques du DMSO. J'aimerais bien maintenir mon passage à vendredi, sinon ça décale tout le plan de manip prévu.  [...] Merci beaucoup, je vais suivre vos conseils (et rectifier mon protocole de décongélation.), il me reste beaucoup de cellules vivantes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN pour puce

oui je fait mes extractions au trizol/chlo, je congele mon culot dans 10 mL de trizol, et le lendemain je lance mon extraction, pour l'instant on m'a proposé 2 pistes, 1-mon volume de trizol est tros important et il prend bcp de temps à decongeler (c'est vrai ca prend une 1/2 à temperature ambiante) et les ARN se dégrade pendant ce temps la (je pensais qu'ils étaient protégés dans le trizol, il parrait que non).  [...] j'ai testé de congeler mes culots et de rajouter le trizol lors de la decongélation. puis j'ai suivi le m^me protocole que d'hab, j'ai une le m^me résultat (énorme bande 5S. j'ai aussi tenté de traiter mon culot au lysozyme avant l'extraction et la c'était bon, apparament je ne casser pas suffisament mes cellules (mmm je n'ai pas encore passé mes échantiloons sur agilent, mais le profiles sur gel d'agarose n'est pas mal du tout.  [...]

Recongelation

d'apres ce que j'ai compris elles ne se développent pas mais reste en vie donc avec une décongélation elles se multiplient et si l'on recongele / décongéle alors d'autre bactéries vont apparaitres et se multiplier ainsi que les autres qui hibernaient.  [...] - la décongélation replace l'aliment décongélé dans une position de substrat pour les bactéries. retour à une température et à une teneur en oxygène favorable au développement bactériologique DONC multiplication. La re-congélation puis la re-décongélation produise les mêmes conditions favorables à la sur-multiplication des bactéries.  [...]

Alimentation : peut-on recongeler un aliment décongelé ?

000 milliards de milliards. Si vous recongelez le steak, ces bactéries ne seront pas détruites mais vont à nouveau rester tapies et recommencer à proliférer lors de la deuxième décongélation. Or, plus le nombre de bactéries est élevé, plus le risque d' intoxication alimentaire est grand.  [...] Les fruits et légumes, le pain ou les gâteaux peuvent en principe être recongelés tels quels, à condition de ne pas dépasser 24 heures d'attente. Cela dit, une succession de cycles congélation/décongélation va de toute façon dénaturer la texture et le goût des produits.  [...]

Préservatif craqué ??

mais comme en général, on laisse décongeler jusqu'à une température qui avoisine les 15-20°C, les bactéries mésophiles commencent à se multiplier, mais plus lentement. Donc s'il est vrai qu'il ne faut pas recongeler un produit décongelé, la décongélation n'accélère pas le processus de multiplication bactérienne.  [...] En ce qui concerne les produits congelés, aucun aliment n'est totalement stériile même après un grand lavage. le problème vient du fait qu'on part avant congélation d'un taux de bactéries = x et que lors de la décongélation avec les nutriments dont elles disposent, au bout de quelques heures on aura un taux de x n.  [...]