• Santé - échantillons, Protocole, Précis

Définition | Microscope électronique en transmission - MET - TEM | Futura Santé

Les échantillons doivent être préparés selon un protocole précis, qui doit à la fois conserver sa structure et être conducteur pour laisser passer le faisceau d'électrons. Des coupes très fines de l'échantillon sont réalisées à l'ultramicrotome (de 60 à 100 nanomètres ).  [...] Des colorations aux métaux lourds sont également possibles pour augmenter les contrastes de structures particulières des échantillons, préalablement placées sur des grilles d'observation.  [...]

MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

j'ai eu présque les mêmes résultats, avec les échantillons non purifiés et puis j'ai fait une purification, et après la purification ces troisièmes bandes n'étaient plus visualisées sur le gel.  [...] effectivement mes échantillons d'ARN sont extraits o trizol (phénol-isothiocyanate de guanidine)-chloroforme, précipités à l'isopropanol et lavé à l'éthanol. protocole classique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Micro ARN

Extraction chloroforme (Attention en recuperant le surnageant a ne pas vouloir trop en recuperer au risque de contaminer ton echantillon).  [...] merci pour ton protocole. J'ai réalisé le même pour l'extraction d'ARN dans le plasma sauf que je précipitais 30 min à -80°C et non o/n à.  [...]

[Biologie Moléculaire] Produit PCR / microsatellites

Quand j'ai testé ces mêmes primers à plus grande échelle (nombreux échnatillons) en qPCR alors après 35 cycles j'ai la moitié de mes échantillons (dont mon contrôle positif dillué au 100e) qui ont une Cp supérieure à 30.. Même protocole utilisé je me dis que les échantillons sont pas assez concentrés.  [...] Difficile de savoir pourquoi ton superviseur ne veut pas que tu étudies des microsats. Soit il a essayé sur cette espèce et sait que ça ne marche pas, soit c'est du fait des propriétés générales des microsats. Ces marqueurs évoluent vite et de plus comme les mutations peuvent aussi bien augmenter que diminuer le nombre de répétitions, il y a beaucoup d'homoplasie.   [...]

[Biochimie] Enlever les acides nucléiques

Je suis à la recherche d'un protocole pour se débarrasser des acides nucléiques après la lyse cellulaire d'un fungus. Je ne souhaite pas utiliser un détergent cationique car ma protéine précipite avec les acides nucléiques. Je souhaite utiliser une digestion RNAse and DNAse.  [...] par expérience, pubmed n'est pas le bon endroit pour trouver des protocoles. Recherche sur des sites comme protocol online ou bien sur les protocoles accompagnant les produits.  [...]

[Biochimie] Recherche de protocole

bonjour j aimerais trouver un protocole pour la recherche de catalase et de peroxydase sur des echantillons d epinard et de salade. Si je pouvais trouver la traduction en espagnol ca serait bien car cest pour mon stage qui se deroule en espagne et nous navons pas de protocole.  [...]

[Biochimie] RNA seq

Mon expérience perso à titre d'exemple. mon sujet de recherche portait sur l'effet de la salive de tique sur les gènes des cellules de peau. Je voulais savoir exactement quels étaient les gènes dont l'expression était modifiée par la piqûre de tique. J'avais donc des échantillons de peau saine (pour avoir un profil en conditions normales) que j'ai comparés à des échantillons de peau prélevés localement sur un lieu de piqûre de tique.  [...] RT-PCR, analyses des amplicons obtenus. j'ai pu constater notamment l'induction de gènes de l'immunité cutanée. Dans mon cas c'était une manip super délicate pour être vraiment quantitative (il me semble avoir fait du semi-quantitatif par prudence, mais je n'ai pas eu le temps de mettre au point pour améliorer la précision de ma manip), peut-être que d'autres protocoles ou d'autres échantillons permettent d'être super précis. Mais voilà pour les grandes lignes.  [...]

[Biochimie] Méthode de Bradford

de mon coté je rencontre des difficultés pour tracer la droite,je sais que ça sera la DO en fonction de la concentration de BSA.mais le problème c'est qu'on a utilisé 5 tubes dont un est le blanc plsu deux autres de 1/10 et 1/100 de serum dilué (notre échantillon à doser est l'immun serum),dans ce cas la comment je tracerai ma droiteest-ce qu'elle passera par le zero ou nonet comment interpréter mes résultats.  [...] Ensuite tu reportes sur la courbe la DO que tu as obtenu pour tes deux échantillons (1/10eme et 1/100eme) et tu n'as plus qu'à lire la concentration de tes échantillons (en n'oubliant pas de rétablir le facteur de dilution). Pour être plus précis tu peux également calculer la concentration à partir de l'équation de la droite. A toi de voir.  [...]

Interpréter une courbe de fusion PCR

Je fais de la PCR quantitative (Sybr Green) sur le gène de l'actine. Après amplification, je réalise une courbe de fusion. Lors de l'analyse de la courbe (module Tm calling), au lieu du pic habituellement rencontré, j'ai obtenu un plateau.   [...] ca peut etre compliqué. On peut notamment penser a une température d'annealing trop froide, ce qui fait du non spé. Qelles sont vos amorces et votre protocole de PCR quels sont les échantillons.  [...]

[Biologie Cellulaire] HEK et nitrogène

je cultive depuis plus d'un an une lignée HEK293 transfectée avec un plasmide donnant une résistance à la néomycine. Avec le temps mes cultures ont de plus en plus de mal à redémarrer (même les échantillons à faible passage) et je me demande s'il ne s'agit pas des conditions de stockage (mon protocole de culture n'a pas varié depuis).  [...] b) mettre mes échantillons dans cryotube et congeler pendant qq heures (4-7h) à -20°C puis mettre à -80°C. Ensuite quelque soit le protocole utilisé, lorsque je veux réutiliser mes échantillons, je décongèle rapidement (2 min dans bain Marie), centrifuge 100g, 5 min pour enlever DMSO, récupération du culot et distribution.  [...]