• Santé - échantillons, Contrôle, Positif

[Biologie Moléculaire] Produit PCR / microsatellites

Quand j'ai testé ces mêmes primers à plus grande échelle (nombreux échnatillons) en qPCR alors après 35 cycles j'ai la moitié de mes échantillons (dont mon contrôle positif dillué au 100e) qui ont une Cp supérieure à 30.. Même protocole utilisé je me dis que les échantillons sont pas assez concentrés.  [...] Difficile de savoir pourquoi ton superviseur ne veut pas que tu étudies des microsats. Soit il a essayé sur cette espèce et sait que ça ne marche pas, soit c'est du fait des propriétés générales des microsats. Ces marqueurs évoluent vite et de plus comme les mutations peuvent aussi bien augmenter que diminuer le nombre de répétitions, il y a beaucoup d'homoplasie.   [...]

[Biologie Moléculaire] Témoins positifs et négatifs PCR

Cela permettra de voir si un de tes composants est contaminé avec un ADN qui peut produire du signal, du coup si tu as un signal dans ton contrôle négatif, tu ne sauras pas si le signal obtenu dans tes échantillons est spécifique ou lié à une contamination (permet donc d'éviter les FAUX POSITIFS).  [...] Le contôle positif le plus courant est d'ajouter un fragment d'ADN connu dont tu es sur qu'il produira le signal attendu. De la même manière, si tu n'as pas de signal dans ton contrôle positif tu ne sauras pas si tes échantillons sont négatifs ou si l'amplification n'a pas fonctionné (permet donc d'éviter les FAUX NEGATIFS).  [...]

ELISA courbe d'etalonnage

Quant à la détection, si les témoins négatifs sont fats correctement, on peut se contenter d'une simple significativité statistiques. on fait souvent témoins et échantillons en trois exemplaires. si l'échantillon est significativement au-dessus du contrôle négatif le etst est déclaré positif.  [...] QUand lhybridome est dilué, pour obtenir la concentration de la solution mère il me faut multiplier mon résultat par le facteur de dilution (a mois que je me trompe). Le problème est que je trouve des concentrations de plus en plus importantes, plus l'échantillon est dilué.  [...]

Mesure de l'activité antioxydante

Un millilitre de l'extrait à différentes concentrations (de 0,007à 2,5mg/ml) est mélangé avec 2,5ml d'une solution tampon phosphate 0,2 M (pH 6,6) et 2,5ml d'unesolution de ferricyanure de potassium K3Fe(CN)6 à 1%.L'ensemble est incubé au bain-marie à 50°C pendant 20 min ensuite, 2.   [...] 700nm contre un blanc semblablement préparé, en remplaçant l'extrait par de l'eau distillée qui permet de calibrer l'appareil (UV-VIS spectrophotomètre). Le contrôle positif est représenté par une solution d'un antioxydant standard. l'acide ascorbique dont l'absorbance a été mesurée dans les mêmes conditions que les échantillons.  [...]

qPCR

Si vous voulez observez un petit fold-change (1.5-2 fold), il vous faudra des échantillons parfaitement propres, probablement faire des quadruplicata, penser à utiliser 2 essais pour le même gène, et utiliser des contrôle positif avec des fold-change connus. (L'article est en pièce jointe).  [...] Tu ne peut vraiment pas te passer de calculer l'efficacité des amorces avant de faire du quantitatif, enfin je ne le concois pas, c'est comme faire une PCR classique et oublier de mettre le BET (ou autre colorant) dans le gel, et dire après je ne vois rien c'est dans mon echantillon ya pas le gène en question.  [...]

Grippe : Google surestime l'ampleur des épidémies

Chaque hiver, la grippe saisonnière touche des millions de personnes en France. Elle peut entraîner des complications graves, particulièrement chez les personnes fragiles. Prédire l'arrivée d'une épidémie permet de mieux la contrôler. Mais l'outil de prédiction développé par Google est-il vraiment fiable Les chercheurs s'interrogent Matteo Bagnoli, Flickr, cc by 2.0.  [...] Cependant, la recherche de symptômes sur Internet ou la reconnaissance de ces symptômes par un médecin ne valent pas une analyse épidémiologique sérieuse. Aux États-Unis, moins de 10 % des échantillons testés par les centres pour le contrôle et la prévention des maladies ( CDC ) retournent un résultat positif.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse, vecteur et positive control

Nous effectuons des pcr en utilisant différents echantillons et pour chaque set on fait un echantillon avec 1 vecteur. Ensuite on fait une electrophorese sur gel d'agarose. Puis on regarde le resultat.  [...] Pour le contrôle positif. la PCR sur le vecteur te permet de vérifier que tes conditions de PCR sont OK, et que la réaction de PCR s'est bien déroulée. Très utile si la PCR sur les échantillons test ne donne lieu à aucune amplification ou à des amplifications spécifiques.  [...]

[Biologie Moléculaire] Cp du contrôle négatif en qPCR

Jusqu'à maintenant je travaillais avec 35 cycles et des primers hautement spécifiques. Mais voilà depuis deux semaines la moitié de mes extractions me donnent des Cp de 30 et c'est même le cas pour mon contrôle positif que est dillué au 100e. J'ai essayé avec l'ensemble de mes couples de primers spécifiques et ça me donne plus ou moins le même résultat.  [...] J'ai donc essayé d'augmenter mon nombre de cycles à 40 pour voir et là tadaa presque l'ensemble de mes échantillons présentent des Cp inférieures à 30 et mon contrôle positif retombe à une cp de 28. Seul problème mon contrôle négatif. il a dans toutes mes qPCR été positif même en changeant tout (même avec 35 cycles), probablement problème de dimères ou conta par l'air, avec un nombre de cycles de 40 il a une Cp de 30.  [...]

[Immunologie] Contrôle positif et négatif

Le contrôle négatif sert aussi à démontrer que tes réactifs ne sont pas contaminés, et qu'un résultat positif est bien du à ton échantillon et non à un Ag déjà présent dans ta plaque.  [...] Le contrôle positif valide les résultats négatifs et ta manip en général. Si tu n'as pas de témoin positif et que tous tes échantillons sont négatifs, peux tu affirmer que tous n'ont pas l'Ag ou est ce que ça peut être du à un problème de manip.  [...]

[Microbiologie] cytométrie en flux

Lors d'une mesure en cytométrie en phase liquide (cytométrie en flux), comme différencie-t-on les faux positifs (particules auto-fluorescentes) des vraies bactéries.  [...] Pour l'inhibition, on peut maintenant mettre un contrôle positif interne dans les puits, avec une sonde spécifique. Si ni l'échantillon ni le contrôle ne sont amplifiés, on sait qu'il y a des inhibiteurs.  [...]