• Santé - échantillons, Cellules, Tampon

Matériels et méthodes | Dossier

Les cellules sont prélevées sur héparinate de lithium à partir de sang de volontaires sains. Le sang est dilué au demi dans un tampon Na 2 HPO 4 (PBS) à 0,1 M et à pH 7,4. Au fond de chaque tube, 10 ml d'Histopaque-1077 (Sigma) sont déposés. Après une centrifugation à 400g pendant 30 minutes à température ambiante, les monocytes et les lymphocytes, se trouvant à l'interface plasma-Histopaque, sont récupérés dans un tube à part et mis à centrifuger à 400g pendant 10 minutes, ensuite ils sont mis dans un tampon Hanks' HEPES et conservés à 4°C avant leur utilisation.  [...] Les cellules sont remises en suspension dans le tampon de lyse pour western blot (cf. annexe 2) à la concentration de 50.10 6 cellules /ml. Elles sont soniquées 6 fois 5 secondes, en prenant garde de bien refroidir les tubes entre chaque passage. Tous les échantillons sont dilués au tiers par une solution échantillon (cf.  [...]

[Biochimie] Pb échantillon gel Tris-Tricine

Je travaille sur un peptide inférieur à 3 KDa et je voulais le visualiser en western blot. Mais je rencontre un petit problème. lors de la migration en gel tris-tricine, mes échantillons se reserrent )( dans mon gel de séparation. Pb de sels Mes échantillons sont préparés avec des cellules fraîches et broyées directement dans le tampon d'échantillon.  [...] Rq. une migration test pour le même type de gel (mêmes réactifs) a fonctionné avec d'autres échantillons (culots secs congelés d'autres cellules).  [...]

[Biologie Moléculaire] Profil PCR/RAPD

je viens de procéder à une amplification PCR avec deux amorces différentes, pour chaque amorce j'ai utilisé un tampon de réaction différent juste pour voir ce que ça donnait lors de la migration (l'un coloré l'autre transparent).  [...] 1-les échantillons avec le tampon de réaction transparent auquel j'ai ajouté un tampon de charge n'ont rien donné= aucune bande, rien, nada.  [...]

Solution tampon électrophorèse

L'électrophorèse consiste à faire migrer des molécules grâce à un courant électrique qui va traverser le gel (d'agarose ou de polyacrylamide par ex) qui contient tes échantillons. Il te faut forcément quelque chose pour conduire ce courant. il s'agit de la solution tampon, qu'on appelle aussi tampon de migration.  [...] Techniquement, quand tu fais une électrophorèse, tu as une cuve dans lequel tu places ton gel, ensuite tu recouvres de tampon (ou l'inverse mais osef), tu déposes tes échantillons dans les puits de ton gel, tu fermes ta cuve et tu allumes ton générateur pour appliquer le courant électrique.  [...]

[Biologie Moléculaire] BET ou Bromure d'Ethidium...quelles aternatives ?

C'est un tampon de charge 6X qui se stocke à 4°C. Du coup on reprends les échantillons d'ADN avec ce tampon, et on ne met rien dans le gel. On fait d'une pierre deux coups.  [...] Dans le laboratoire ou j'ai effectué l'un de mes stages cette année, mon encadrant m'a montré la révélation sur gel avec le BET. Il prépare son gel d'agarose ave tampon TAE, et pour le refroidir il lui met de l'eau froide. Ensuite, quand il a considéré que c'était ''moins chaud'' il décida de mettre les quelques gouttes de BET dans le récipient.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Peut-être que tu charges trop de protéines Le fait que le profil de migration du marqueur moléculaire soit OK indique que le pb vient de tes échantillons -. vérifier donc le tampon de charge (il semblait marcher avant) et ton matériel initial...tu resuspends combien de culot de bactérie Essaie avec moins.  [...] Tu as bien un changement de couleur du tampon de chargement après les 5 min a 95 degrés et tu centrifuges bien tes échantillons après les avoir fait bouillir.  [...]

[Biologie Moléculaire] Blot: pourquoi papier filtre ?

Ce n'est pas que le champ électrique sera moins fort c'est que l'air, de la bulle, ne conduit pas le courant contrairement au tampon de tranfert. le transfert ne se fera pas du tout là où il y a des bulles.  [...] dans le cas d'un transfert semi-sec, le papiers filtres sont imbibés du tampon de tranfert. Ils servent donc de reservoir a tampon pour permettre le passage du courant et donc la migration des echantillons.  [...]

Cellules souches

Au final, s'il utilise le choix, il faut s'assurer que l'ensemble des cellules de son échantillons sont dépourvues de ce marqueur.  [...] Depuis peu, les cellules souches caractérisées par le marqueur antigénique CD34, peuvent être sélectionnées positivement par un anticorps monoclonal anti CD34 en utilisant une technique dimmunoabsorption biotine avidine.  [...]

[Biochimie] Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisé du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montrent que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] La force ionique est un parametre essentiel pour le decrochage de l'ADN des colones, donc oui avec un TE10X tu as toute les chances que l'ADN soit encore dans la colone.   [...]

Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisée du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montre que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] il y a une section biologie dans le forum, ta demande y serait mieux placée.   [...]