• Santé - échantillon, Tampon, Azote, Liquide

[Biochimie] Conservation par azote liquide

Esque je suis censée mettre mon échantillon dans un tampon ou je le met directement dans le cryotube que j'introduit dans l'azote liquide.  [...] le sacrifice des souris est réalisé au niveau de notre animalerie (à l'université) et effectivement dés que je récupère mon colon, je l'ouvre et je le rince avec le tampon PBS puis je l'introduit à +4° le temps de terminer rapidement mes sacrifices et d'acheminer mes échantillons à l'hopital où j'ai la possibilité de les conserver dans l'azote liquide.  [...]

[Biochimie] Western blot eNOS

En revanche, lorsque je fait des mise au point, ca marche. La seule différence est que je fait ces mises au point sur tissu (hypothalamus) fraichement prélevé et broye, alors que je fait mes vrais manips sur des tissus broyes et congeles dans l'azote liquide immédiatement apres.  [...] Pourtant, les animaux sont sacrifies, leur hypothalamus est preleve et place dans un ependorf contenant du tampon de lyse (plus des antiproteases) plongé dans un bac de glace. La dessus nous broyons les echantillons au precyllis (temperature maintenue a 4 degres), le surnageant est recupéré puis mis dans un nouvel ependorf qui est jeté dans l'azote liquide.  [...]

Sidaction : l'espoir d'un vaccin contre le virus du Sida renaît

Pour mieux comprendre les modifications conformationnelles du virus liées à l'attachement au récepteur cellulaire, les chercheurs ont utilisé la cryomicroscopie électronique. Contrairement à d'autres techniques (notamment la cristallographie ) qui utilisent des traitements dénaturants pour fixer l'échantillon, la cryomicroscopie consiste à congeler très rapidement l'échantillon ( cryo signifie froid ) dans l'azote liquide (à -195°C) et permet donc d'observer les formes tridimensionnelles des molécules dans leur forme native, puis de les reconstituer par modélisation.  [...] C'est donc en comparant les structures des protéines d'enveloppe associées et non associées au récepteur CD4 que les chercheurs ont découvert une rotation et un écrasement du complexe gp120-gp41. Ce changement structural entraîne l'exposition d'une partie cachée de la protéine gp120, qui pourrait alors subir les assauts d' anticorps.   [...]

[Biochimie] Extraction d'enzymes musculaires

En fait, je désire doser la malate déshydrogénase, une enzyme assez classique du cycle de Krebs. Pour celà, j'excise des muscles de la patte (souris NMRI contrôles), qui sont ensuite congelés dans de l'azote liquide et stockés à -80°c. Pour ma manip de dosage, j'ai testé plusieurs techniques de broyage.  [...] mortier et pillon + azote liquide afin de réduire le muscle en poudre ensuite réhydratation dans du tampon PBS EDTA. Potter + tampon de lyse commercial (pour détruire les membranes cellulaires) sur glace afin de ne pas dégrader mes protéines.  [...]

[Divers] Reconditionnement déchantillions pour histo

Pour tout dire, j'ai l'habitude des echantillons inclus mais n'ai jamais coupé de tissu congelé directement. Sachant que mon échantillon n'est pas fixé mais a été congelé directement dans l'azote liquide puis conservé à -80, puis je disposer directement sur le cryostat pour le couper.  [...] Là encore vous allez avoir un souci. Votre pièce est déjà à -80°C. Du coup quand vous allez la plonger dans la cryomatrice cette dernière va immédiatement congeler avant que vous n'ayez le temps de placer correctement votre pièce. Comme je le disais plus haut, vous ne pouvez pas réchauffer l'échantillon.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dmso

Avec une vitesse de congélation lente, les cristaux sont mieux organisés et moins délétères pour la membrane cellulaire mais la formation de glace extracellulaire augmente la pression osmotique et provoque une sortie de l'eau liquide restant dans la cellule.  [...] Le DMSO permet à l'eau de cristalliser dans un système cubique, moins dangereux que le système hexagonal habituel. Son inconvénient c'est sa toxicité pour la cellule. C'est pourquoi quand on sort un échantillon de l'azote liquide (ou des vapeurs) on le place à décongeler dans un bain-marie plutôt qu'à température ambiante.  [...]

methodes de cryopreservation des cellules

la congélation lente et la vitrification sont les deux techniques employées pour cryoprésever les cellules.j'ai écris dans mon cours que pour conserver les cellules il faut descendre en température lentement par tranche de température de 20° à 0° PUIS FRANCHIR RAPIDEMENT 0° à-5° puis redescendre lentement de -5°à-156° POURQuOI spécialement ces paliers de température et pourquoi aller vite ou moin vite par foisque se passe t il à chaque étape ou k cherche t on à éviter par chaque étape.   [...] ET pour la vitrification on prend les cellules on les met ds quelle type de solution(tampon peut etre doit on rajouter du milieu de culture)on rajoute le melange de cryoprotecteurs en suite j'imagine qu' on met le tout dans un cryotube ou paillette puis on place ds la bonbonne d'azote liquide.  [...]

[Biologie Cellulaire] Effets de la congélation

Une réfrigération brutale, par exemple en plongeant l'échantillon dans l'azote liquide les cristaux sont microscopiques et c'est la raison pour laquelle des cellules comme les spermatozoïdes supportent la congélation sans être détruits.  [...] lors d'un test sur des cellules de lignée NB4, nous avions avec mon groupe de TIPE comparer 4 cas avec les mêmes conditions de congélation et de décongélation en terme de vitesse, de gradient et de méthode de congélation (vapeur d'azote liquide à -80°C). On vérifiait après décongélation l'intégrité des cellules avec du bleu Trypan, un colorant qui normalement ne rentre pas dans la cellule.  [...]

[Biologie Moléculaire] Manipulation de laboratoire - Extraction d'ARN

Voilà les détails. Maintenant, en pratique, j'extrais l'ARN en utilisant le protocole du Tri-Réagent (par Sigma-aldrich). Mon problème est tout à la base de la manipulation. je n'arrive pas à transformer les ménisques en solutions. J'ai tenté de les mettre dans l'azote liquide et de les broyer avec un pilon mais ils sont tellement dur que ça durcit encore plus mais ça ne se casse pas en poudre.  [...] L'azote liquide est le principal truc utilisé car il possède une différence entre la T° de fusion et T° d'ébullition relativement écarté ce qui est préférable pour des utilisation en routine, mais tu as des liquides plus froid que l'azote, tu peux peut-être utiliser un de ceux là et le fait d'amener ton échantillon a une température très basse devrait le fragiliser et il devrait se casser plus facilement.  [...]

[Biochimie] Congélation dans l’azote liquide puis conservation dans le congélateur -80c°

Je dois doser une enzyme chez un gastéropode marin, mais je ne peux pas le faire dès l'échantillonnage. Le protocole de travail me dit que dans ce cas, je dois congeler l'organisme dans l'azote liquide puis le conserver dans le congélateur -80c°.  [...] Ma question est la suivante. je dois laisser l'organisme dans l'azote liquide combien de temps au minimum Après l'avoir extrait de l'azote liquide, j'imagine que je dois le mettre immédiatement dans le congélateur réglé et mis en marche au préalable à -80 c°, mais au moment de l'analyse, quand j'extrais l'organisme du congélateur je dois attendre combien de temps pour la décongélation, et dans quelle température amiante doit s'effectuer la décongélation.  [...]