• Santé - Dosage, Quantité, Protéines

[Biologie Moléculaire] Gamme et témoin BSA

Afin d'étudier l'activité d'une enzyme, nous commençons par le dosage des protéines présentent dans nos échantillons (je m'explique, notre enzyme est extrait de venin de guêpes, afin de pouvoir avoir la même quantité de protéines dans chacun de nos échantillons on réalise un dosage).  [...] Merci. J'ai vérifié et on utilise bien la BSA comme témoin car elle n'a pas d'activité enzymatique, cela nous permet donc de vérifier que l'activité mesurée est bien du à l'ajout de l'enzyme et non à l'ajout de protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] gel 1D

pourtant après dosage la quantité de protéines semble suffisante j'ai par exemple 1.6µg/µl je ramène tout les échantillons à cette concentration, j'ai engagé une plus grande quantité de protéine 65µg. j'ai vérifié les pH des tampon tris pour les deux gels (concentration et séparation) je travaille avec la même source.  [...] je laisse migré à 12 mA constant toute la nuit (voltage max et puissance max), et quand je lance deux gels je mets à 24 mA et pareil le reste au max.   [...]

[Biologie Cellulaire] etude du niveau de phosphorylation d'une protéine en WB

Pensez vous qu'il soit nécessaire de réaliser un dosage des protéines afin de déposer précisement la mm quantité de protéines.  [...] Il est toujours mieux de réaliser un dosage de protéines avant un western blot, cela permet d'être bien sûr de ce qu'on dépose.  [...]

[Biochimie] Gamme étalon BSA

ma gamme se termine à une DO de 0.2OO et on cherche une quantité protéique pour une DO de 0.500), comment fait-on Peut-on extrapoler en divisant la DO par 3 par exemple, on recherche la quantité protéique puis on remultiplie la valeur retrouvée par 3 Merci d'avance.  [...] c'est simple. quand tu fais un dosage indirect, tu fais une lecture d'A sur un produit qui est formé en présence de protéines (complexes), il peut donc y avoir une saturation du système en fonction de la technique. La quantité de protéine n'est peut être plus proportionnelle a l'absorbance.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Et un dosage des protéines extraites avec un Bradford modifié (RC DC biorad) à 750 pour pouvoir exprimer mes activités par quantité de prot extraites.  [...] oui 1% c'est pas rien. Faut tenir compte de ça. Ma seule idée c'est celle de l'extraction à blanc, comme ça tu récupères autant de BSA que dans les échantillons. Sauf si tu as besoin d'une activité relative ou dans ce cas tu ne prends pas en compte l'activité absolue en fonction de la quantité de protéine totale.  [...]

[Biochimie] Extraction d'enzymes musculaires

Ma question est la suivante. J'effectue un dosage protéique de mon extrait musculaire (après l'avoir broyé dans du tampon), un dosage Bradford. Est-ce que quelqu'un connait la quantité de protéines qu'on peut récupérer' en broyant un morceau de muscle de 100 mg par exemple Moi j'obtiens une très faible quantité (enfin, je pense) =.  [...] Au niveau de la quantité de protéine extraite, pourquoi veux-tu une concentration de protéines supérieure à 2 µg/µl sans avoir (enfin je pense vu la tournure du message) mesurer l'activité enzymatique voulue Personnellement je trouve cette concentration satisfaisante.  [...]

[Biologie Cellulaire] Western blot + extraction proteine

Je suis d'accord avec Vinc, mais si je me trompe il est impossible de doser ces protéines dans le laemlli... Alors si on veut faire un dépot avec une quantité précise, je préconiserai le RIPA-N, puis un dosage protéique, et enfin la reprise du volume nécessaire de protéines avec un volume équivalent de laemlli 2X.  [...] Oui le dosage dans le Laemli n'est pas possible en effet, mais il n'est pas forcément necessaire de doser les protéines. L'expérience du manipulateur ainsi qu'un contrôle adapté en western permettent d'obtenir un résultat impeccable (je ne fais que des western et j'ai arrêté de doser mes protéines assez rapidement).  [...]

[Biologie Moléculaire] Resolubilisation des proteines aprés extraction au trizol

Je suis en stage pour le M1. On travaille sur l'hypophyse de rat et on a fait une technique d'extractin d'ARN et de proteines au trizol. Ensuite les proteines sont mises dans du SDS et stockés à moins 20°C. Sauf que quand on a fait un dosage proteique par la methode de lowry d'où on a obtenu des quantités trés faibles de proteine.  [...] Un autre problème peut être que le SDS induit quelques soucis dans les dosages de protéines par la méthode Lowry. Dans certains kits tu as un produit supplémentaire à inclure dans ta réaction si tes échantillons contiennent du SDS, je saurais pas t'en dire plus vu que j'ai toujours utilisé ce genre de kit en suivant bêtement le protocole fourni.  [...]

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

Nous faisons passer notre solution de protéine à travers la colonne échangeuse d'ion, toutes les protéines chargées négativement vont adhérer au support.  [...] Ce serait bien de décrire comment est mesurée l'activité, ainsi que la méthode de dosage de protéine. Et il faudrait mesurer l'activité et la quantité en protéine à chaque étape, avant le sulfate d'ammonium, après.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

Tu lit l'absorbance de ta gamme étalon et trace ta courbe tu auras un courbe de l'absorbance en fonction de la quantité de protéine présente dans tes tubes.  [...] Dans les deux cas quand tu testeras ton tube contenant ta protéine et le colorant, tu va obtenir une DO que tu repporte sur le graphe que tu a tracer manuellement ou c'est le spectro qui le fait automatiquement.  [...]