• Santé - Dosage, Blanc, Tampon, ADN

Conservation d'ADN

Malheureusement je n'ai trouvé aucune autre information. Combien je dois peser si je veux une solution de 1L et combien mettre d'EDTA (les formules me suffise je peux faire le calcul par la suite) Et aussi j'ai extrait mon adn avec du sel du vinaigre et je l'ai fait précipité avec de l'éthanol, est-ce que ça des risque d'interférer avec mon tampon Et pour finir, je vais le doser par spectrophotométrie UV, est-ce que mon tampon risque de brouiller l'analyse (même si je fais un blanc).  [...] Normalement pour le dosage on fait un blanc avec le tampon qui contient l'ADN (donc du TE dans votre cas) même si la différence ne sera pas enorme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quantification de l'ADN

Oui pour tout. Dosage de l'ADN au spectrophotomètre à 260 nm de longueur d'onde et cuve en quartz.  [...] le mieux reste de faire le blanc avec le tampon que tu as utilisé pour éluer ton adn. Certains tampons peuvent interférer avec le dosage.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

Le tampon de charge ne permet pas de précipiter l'ADN mais de le faire couler dans les puits. Êtes vous sure que vôtre système de migration ne présente pas un problème au niveau de la tension par exemple ou alors une électrode qui ne marcherait pas (est ce que ça fait des bulles).  [...] Normalement on lave avec un tampon qui doit contenir de l'éthanol mais l'ADN reste encore sur la silice de la colonne. On centrifuge pour éliminer l'éthanol et on recentrifuge la silice à vide pour finir de sécher (l'éthanol peut sinon faire des interférences lors du traitement de l'ADN pour le dosage ou la migration) On dépose ensuite de l'eau stérile ou alors un tampon d'élution sur la silice de la colonne(perso je préfère l'eau).  [...]

Role de EDTA et NaClO4???

Bonjour, dans un TP de biochimie sur l'isolement et le dosage d'ADN de foie de porc, je dois savoir quel est le role d'un tampon de broyage contenant EDTA et aussi quel est celui du NaClO4 sur une protéine pendant une congelation.Donc si qqun est au courant, merci de me le faire savoir.  [...] de plus, L'EDTA en chelatant les ions Ca2+ va favoriser la disparition des complexes proteiques impliques dans les contacts cellule-cellule tels que jonctions serres et autres desmosomes. les proteins impliques dans ces complexes sont dependantes du Ca2+.   [...]

[Biochimie] Dosage de catalase et glutathion quel tampon utilisé ?

Je veux faire le dosage de la catalase et du glutathion s transférase dans le même tissu (la glande digestive) ça m'arrangerai plus l'utilisation d'un seul tampon, ainsi je n'aurai pas à préparer un tissu pour le glutathion s transférase et un autre pour catalase.  [...] Pour ce qui est du choix de la solution tampon pour le dosage de la catalase et du glutathion s transférase au niveau de la glande digestive je pense qu'il faudra te procurer un protocole bien précis adapté à ce dosage.  [...]

[Biochimie] extraction protéine d'une huile ou d'une cire pour quantification

Dans un premier temps j'ai simplement vortexé 100µL d'huile au 1/10 dans une solution tampon pH9.3. les résultats n'était pas concluant après dosage et la solution est devenue légèrement blanchâtre.  [...] Une autre de mes pistes est la précipitation au sulfate d'ammonium, mais en quel pourcentage de saturation pour avoir une précipitation totale et dans quel type de solution tampon pour également solubiliser mon huile ou ma cire.  [...]

[Biochimie] Sollution tampon votre avis

Est-ce que les composantes de ce tampon ne risque pas de réagir avec celle du tampon que je vais utiliser pour le dosage de l'enzyme (le tampon que dicte le protocole du dosage de l'acétylcholéstérase, destiné à offrir un pH idéal pour la réaction). Ne risque t'il pas de réagir aussi avec la acétylcholine que je vais préparer et le DTNB (l'enzyme doit dégrader l'acétylcholine pour donne du thiocholine qui va ce lier au DTNB et le spectrophotometre va mesurer l'absorpition du produit thicholine-DTNB).  [...] Les gens qui on utilisé ce tampon, ont,aussi, fait le dosage d'autres enzymes existant dans cet homogénat préparé avec ce tampon. Il l'on utilisé pour la préparation des glandes digestives et aussi le pied du Gastéropode.  [...]

[Biochimie] Centrifugeuse différentes vitesses

Pour faire le dosage d'une enzyme la catalase, je prépare le tissu dans un tampon lyse. On me dit qu'il faut centrifuger à 9000 g pour avoir la fraction mitochondriale (contient les mitochondries, les lysosomes et les peroxysomes).  [...] Pour faire le dosage d'une protéine Métalothionine, je prépare le tissu dans un tampon lyse. On me dit qu'il faut centrifuger à 30000 g pour avoir la fraction microsomale (contient les rybosomes et les réticulums endoplasmiques).  [...]

[Biochimie] Dissolution d'un culot de protéines

Sinon moi je le reprenais dans mon tampon de dépot (SDS et b-mercapto) pour Western, et je faisais bouillir immédiatement pendant 10min, puis je déposais.  [...] Pour doser les protéines extraites dans un tampon avec du SDS, je dose avec le kit BCA de Pierce. Pour les protéines dans de l'urée (8 ou 9M) je dose avec le Bradford. Il y a peut-être quelqu'un dans un labo près du tien qui en a un peu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

1) J'ai des ARNs que je voudrait nettoyer. La DO 260/280 est bonne (. 2) mais je suis apparemment contaminé par les sels du tampon RLT (extraction sur colonne) puisque ma DO 260/230 n'est que de 1,3. Est-ce que vous pensez que ça peut poser un problème pour les envoyer en Q-RT-PCR Et si oui, pour éliminer ces sels, est-ce qu'une simple précipitation à l'isopropanol (+lavages à l'EtOH) suffirait.  [...] Concernant les protéine j'ai eu un gros culot donc ça a l'air de marcher mais j'ai pas encore pu faire de quantification parce que mon kit de dosage n'est pas adapté (il interfère avec mon tampon de reprise). J'attends un kit de dosage approprié d'ici peu puis je les ferai migrer pour voir la tête qu'elles ont.  [...]