• Santé - Digestion, Restriction, ADN

[Biochimie] enzyme de digestion-restriction

On parle d'enzyme de restriction. Elle reconnaît spécifiquement des séquences d'ADN appelés site de restriction et induit une digestion de l'ADN.  [...] En PFGE, on peut parler d'enzyme de macro-restriction puisqu'elle génère des macro-fragments d'ADN (de + de 50 kb) résolus par électrophorèse en champs pulsé.  [...]

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

Pour t'amener sur la bonne réflexion. sais-tu si l'ADN de ce virus est linéaire ou circulaire As-tu la carte du génome qui te montrerait les sites de restriction dudit génome.  [...] Piste 3. on voit deux bandes. ça correspond à combien de fragments du coup Donc à combien de coupures Donc à combien de sites de restriction EcoRI.  [...]

Carte de restriction

Bonsoir, je n'arrive vraiment pas à comprendre la notion de carte de restriction, en fait il y a un exemple particulier qui me tracasse, disons que nous avons une portion d'ADN à étudier et que nous avons deux cas deux figures qui se présentent soit la formation soit l'abolition d'un site de restriction et nous allons faire une double digestion avec deux enzymes.  [...] Tu ne le mentionnes pas mais tu ne fais pas simplement une électrophorese, si Y'a un southern blot normalement dans ton histoire (c'est un détail important...), non Parce que tu nous parles de bandes que tu vois en électrophorèse et du coup je ne vois pas en quoi ta sonde est utile.   [...]

microbiologie - CARTE DE RESTRICTION

Voilà, je n'ai jamais suivi de cours de bio depuis le lycée, et mon prof me demande de faire une carte de restriction sans m'expliquer ce qu'était le phénomène. une digestion de restriction, un adn plasmidique circulaire, bref j'ai dû mal à me représenter de quoi il s'agit.  [...] Une carte de restriction c'est une séquence où tu peux visualiser tout les sites de coupures des enzymes de restriction. Ça peut être une carte d'un plasmide où d'un génome. C'est utile pour savoir la taille de tes fragments obtenue après digestion avec une enzyme de restriction spécifique.  [...]

Dénaturation de l'adn en pH acides

D'ailleurs en parlant de dénaturation de l'ADN, on parle souvent de digestion par des enzymes de restriction de l'ADN avant des techniques de séquençages comme des Southern blot etc.  [...] Pas necessairement, souvent n'importe quelle enzyme de restriction coupera n'importe quel ADN genomique. Cependant il y a certaines limites. Par exemples.  [...]

plamide repris en EDTA et digetion enzymatique

J'ai extrait un plasmide que j'ai repris dans du tris-EDTA. Ensuite, j'ai digéré celui-ci par une enzyme de restriction mais mon ADN est complètement dégradé. Après avoir fait des tests, des vérifs et de la lecture, il s'avère qu'il ne faut pas de présence d'EDTA pour une digestion enzymatique.  [...] De quelle enzyme s'agit t'il Certaines présentent une activité STAR qui correspond à une reconnaissance anormale de sites liée à une perte de sélectivité. Pour l'éviter il faut éviter de travailler avec un excès de sel ou une durée d'incubation trop longue mais d'autres paramètres ont une influence, peut-être que la concentration en EDTA peut jouer.   [...]

électrophorèse sur gel d'agarose

J'ai eu un TP de biotechnologie où on a fait une électrophorèse sur gel d'un plasmide purifié non digéré et d'un plasmide purifié dirigé par deux enzymes de restriction.  [...] J'ai eu les résultats de la digestion et j'observe dans chaque cas 2 bandes. pour le plasmide non digéré j'ai une bande claire puis une bande foncée. et pour le plasmide digéré, j'ai d'abord la bande foncée puis la bande claire.  [...]

Différences d'ADN entre les ètres vivant ?

Je suppose que si l'on fait intervenir une série d'enzyme de restrictions et qu'on fait une électrophorèse, on pourrait voir se détacher des gênes inattendus (chez l'homme) d'autant plus facilement que l'espèce est éloignée. Mais n'ayant jamais pratiqué ce genre d'analyse (et je l'ai vu faire en laboratoire qu'une seule fois) j'ignore si ce serait frappant ou pas (ou pour reprendre la métaphore d'Elianix, j'ignore si on peut se rapprocher facilement plus près pour mieux voir ).  [...] Oui, bien sûr, il doit exister des enzymes de restriction très spécifiques à l'homme (je ne suis pas sûr que ce soit suffisant. Distingueraient-ils des grands singes par exemple Plus d'info si un biologiste passe par là).  [...]

[Microbiologie] digestion de plasmide

j'ai digéré mon plasmide pbluescript avec ECOR I le problème c'est que je me suis rendue compte après que le tampon OPA seul avec le plasmide sans Enzyme provoque une digestion de ce dernier donc le tampon contient des endonucléases sachant que je ne peux pas jeter le tampon parce que sinon je dois patienter 3 mois pour recevoir la prochaine commande une dilution de tampon serait elle efficace pour se débarrasser des nucléases Même si je sais que ce n'est pas la bonne solution.  [...] Si dans le tampon que tu as utilisé y a des nucléases, tu peux balancer ta restriction que tu as faites (car ton ADN est coupé dans tous les sens) et la refaire avec un tampon plus adapté. Si je me trompe pas, un bête tampon H fera l'affaire pour une digestion EcoRI de pBluescript (le tampon est fourni avec l'enzyme).  [...]

[Génétique] taille moyenne fragments de restriction

Je bloque sur une question où l'on me demande de calculer la taille moyenne des fragments de restriction après digestion par ecoR1 (site reconnaissance. GAATTC) de l'adn humain.  [...] Après ça il ne te reste plus qu'a multiplier la fréquence d'apparition de GAATTC par le nombre de paire de bases dans le génome humain pour avoir le nombre de sites théoriques EcoRI dans notre génome. Et vu que tu désires avoir la taille moyenne des fragments, tu n'as plus qu'a diviser la taille du génome par le nombre de séquences EcoRI.   [...]