• Santé - Digestion, Plasmide, Profil, Bande

miniprep ADN et RNase

Lorsque je regarde mon profil ADN après digestion il est exactement le meme que le non digéré. Sachant que le profil du non digéré n'est pas la taille que j'attendais (je vois certainement plusieurs formes de mon ADN).  [...] Le résultat après digestion est que pour un plasmide j'obtiens un profil à 7000 et 3000pb alors que la deuxième bande devrait etre à 1000. Et pour le deuxième plasmide j'ai seulement une bande à 3000pb alors que je devrai avoir une seconde vers les 5000.  [...]

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

j'ai fais migrer ma prep plasmidique brute (sans digestion préalable)et j'ai 5 bandes, mais la plus haute correspond à une taille de 5kb et la plus basse de 5kb.  [...] apropos de ce sujet,dans un profil d'electrophorese comment on arrive a distinguer entre une bande qui correspond a un plasmide,ou a un chromosome,,  [...]

[Microbiologie] Profil PFGE

j'ai une petite question.Lors des analyse d'un profil PFGE,j'arrive pas à comprendre comment on peut distingué entre une bande qui correspond à un plasmide ou à un fragment d'un chromosome,ou à un mini chromosome,ou à un ARN.. c'est selon la taille de la bande.  [...]

[Biologie Moléculaire] Programme de clonage

D'après ce que j'ai vu, il y a d'autres fonctions sympas. Une digestion automatique (ton plasmide + une ou plusieurs enzymes) et il te donne le profil sur gel. Les fonctions de bases de DNA strider. Si je dis pas de bétises tu peux faire du Gateway et même du shRNA.  [...] Je vous donne un exemple. en voulant cartographier le plasmide pEGFP-N1 de Clontech ( http.//www.clontech.com/images/pt/di...s/PT3027-5.pdf ), j'ai remarqué qu'après un Scan, le promoteur CMV n'apparaît pas. En effet, la séquence consensuelle diffère de celle de la librairie d'un seul nucléotide (en position 509 de votre séquence, il y a un C, alors que c'est un G dans la séquence consensuelle).  [...]

Carte de restriction d'un plasmide inconnu

Ensuite, il n'est pas possible de mélanger toute les enzymes. Soyons fou, et admettons que tu veuille mettre ton plasmide et tes 6 enzymes en même temps. Tu va devoir choisir un tampon de digestion (ph, concentration en sel) unique pour toute tes enzymes. et certaines ne fonctionneront alors pas (enfin, il est possible une astuce, mais pas avec un choix restreint d'Ez).  [...] Enfin, je conseillerai de faire cette analyse en deux étapes. La première digestion/migration avec des enzymes seules (+plasmides ), les 6. Puis tu t'arrêtes, tu regardes le profil de digestion, et tu relance une digestion avec des doubles (ou triple, si possible) digestion.  [...]

[Biochimie] Poids plus élévé après digestion enzymatique

tu sais quel est le profil que tu dois obtenir après digestion si c'est un produit PCR c'est linéaire. Tu n'as qu'un fragment apres digestion C'est pas du a une structure de repliement.  [...] C'était une digestion des sites de restrictions d'un fragment que j'avais amplifié par PCR, sur mon gel je ne dois obtenir qu'un seul fragment d'environ 1000bp.  [...]

[Microbiologie] Viabilité d'une bactérie et ARN - Page 2

je pars d'un échantillon de tissu (des fragments d'intestins d'insecte) minuscule (moins que 100 mg) et pas vraiment propre (débrits cellulaires, sang, protéines,...). à la fin de la manip, j'ai trop peu (ou pas) de produit visible au fond du tube (après la dernière centrifugation du protocole, on a théoriquement un culot d'ARN qu'on redissout dans de l'eau), les concentrations lues par le spectro sont, pour la plupart, faibles et les bandes observées sur les gels de cheking à peine visibles.  [...] Moi après la reprise de mes ARN, je rajoute une étape de purification au LiCl. C'est assez efficace et ça donne ensuite de très beaux profils au nanodrop. Pas de problèmes ensuite en RT.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment savoir qu'un ARNm est entier ?

Dans un deuxième temps j'ai produit un anticorps reconnaissant cette protéine et j'ai fait un western avec l'anticorps purifié. J'observe alors une bande au bon poids et d'autres plus petites (ne fait pas une smire, il n'y a que 3 bandes de plus).  [...] Toutes les bandes risquent de ne pas suivre le même profil, certaines bandes risquent même d'être stimulées par le siRNA spécifique de ta protéine... En plus de ça, si les autres bandes suivent le même profil d'extinction que la bande à 100 kDa, cela n'apportera aucune preuve d'isoformes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr 16s ADNr qui présente des hybridations non spécifiques!

Tu peux aussi réduire le temps de l'hybridation et de l'élongation, plus ceux ci sont longs plus les amorces pourront se fixer sur des sites sensiblement équivalents aux séquences d'intérêt. Un bond de 10°C... c'est quand même énorme, le mieux est de disposer d'un thermocycleur pouvant faire des gradients sur la plaque, mais bon, il faut qu'il soit quand même récent.   [...] J'ai déja eut le ca quand j'ai voulu sequencer l'ADN codant pour l'ARN 16s avec des bandes plus petites et plus grandes. Pas d'affolement aux séquencage il je n'ai pas eut de problèmes (peut etre un ou deux séquancage de pourrie sur 450). Oublie pas qu'il peux y avoir plusieurs copies du 16s dans ton génome.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot profil actine

Je fais actuellement des mise au point de western blot et je me retrouve avec un profil de beta actine avec plusieurs bandes (bande en plus en dessous de la bande attendu). Avez-vous déjà eu un profil comme ça comment faire.  [...] Je rejoins sr sur le fait que tu as peut-être lysé des cellules déjà souffrantes, car un profil de plusieurs bandes d'Actine peut être lié à de l'apoptose cellulaire.  [...]