• Santé - Digestion, Enzymes, Restriction

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction sur plasmides- Digestion complète et incomplète

.. bref, pour tout un tas de raisons. Et comme on ne maitrise jamais parfaitement chacun de ces paramètres, on ne peut pas non plus prévoir si la réaction sera complète ou non. Surtout si plusieurs enzymes différentes sont utilisées pour chacun des sites. Après, si on fait un électrophorèse, on peut quantifier l'avancement de la digestion pour chacun des sites, car en général, les différents fragements n'ont pas la même taille.  [...] dites moi svp comment peut on trouver le nombre de fragments d'ADN produits lors d'une double digestion du plasmide pCR-gai par les enzymes de restriction HindIII et EcoRI et leurs tailles respectives.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr sur colonies clonage

Si tu doutes vraiment de la PCR colonies dans tes conditions/enzymes/clonage, tu peux toujours tester sur quelques minipreps, mais je n'ai jamais eu le cas.  [...] J'ai utilisé la kit Qiagen avec succès pour extraire mon produit de PCR du gel d'électrophorèse. En revanche, je ne connais pas les autres kits. Je n'ai pas fait de clonage depuis maintenant deux à 3 ans, mais dans mon souvenir, je ne faisais pas de purification après la digestion, mais la ligation directement.  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

* Les enzymes que tu cites, HindIII et EcoRI, sont appelées enzymes de restriction. Elles vont reconnaître des endroits particuliers au sein de l'ADN. des sites de restriction (des séquences palindromes, il y a une discussion dessus, si je ne m'abuse, donc regarde ).  [...] * Dans l'analyse par électrophorèse, tu vois des choses différentes en fonction de la conformation de ton ADN. Ainsi, dans le cas simple où on utilise de l'ADN linéaire (ton plasmide en morceaux après la digestion par les enzymes de restriction), plus c'est bas, plus c'est petit.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole digestion

Ben disons que la restriction ca peut prendre la tête, les enzymes qui ne coupent pas, les enzymes qui ne sont pas compatibles, faire du séquentiel. La chiotte quoi.  [...] derniere chose, n'oublie pas qu'il ne faut pas depasser 10% de ton volume total en enzyme de restriction. Sinon le glycerol qu'elles contiennent fini par totalement perturbé ta digestion (inhibition, activité star etc...).  [...]

Purification Séphacryl S-400

Sephacryl S-400 High Resolution to separate polysaccharides, macromolecules with extended structures and even small particles such as plasmids. (fractionation range globular proteins 2 × 104–8 × 106).   [...] J'aurais voulu savoir si le séphacryl S-400 permettait d'éliminer efficacement la Taq pol, car actuellement je voudrais faire du clonage par restriction/ligation. Je sais que la taq pol peut être gênante après digestion des fragments PCR par des enzymes de restriction, puisque les résidus de Taq pol viendraient potentiellement compléter les extrémités collantes.  [...]

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

J'ai fais une extraction d'ADN puis je l'ai mis en présence d'enzyme de restriction ( c'est le TP basique avec les enzymes BamHI, EcoRI, HindIII) c'est de l'ADN de phage lambda cependant comment savoir si l'ADN a été digéré par élélectrophorèse sur gel d'agarose car j'observe plusieurs fragments mais je comprends pas trop si quelqu'un peut m'éclairer merci infiniment.  [...] Tu as l'air de savoir ce qu'est une enzyme de restriction et aussi de savoir interpréter une électrophorèse, je ne vois pas bien ce qui te bloque pour réussir ton exercice.  [...]

électrophorèse sur gel d'agarose

J'ai eu un TP de biotechnologie où on a fait une électrophorèse sur gel d'un plasmide purifié non digéré et d'un plasmide purifié dirigé par deux enzymes de restriction.  [...] J'ai eu les résultats de la digestion et j'observe dans chaque cas 2 bandes. pour le plasmide non digéré j'ai une bande claire puis une bande foncée. et pour le plasmide digéré, j'ai d'abord la bande foncée puis la bande claire.  [...]

Différences d'ADN entre les ètres vivant ?

Je suppose que si l'on fait intervenir une série d'enzyme de restrictions et qu'on fait une électrophorèse, on pourrait voir se détacher des gênes inattendus (chez l'homme) d'autant plus facilement que l'espèce est éloignée. Mais n'ayant jamais pratiqué ce genre d'analyse (et je l'ai vu faire en laboratoire qu'une seule fois) j'ignore si ce serait frappant ou pas (ou pour reprendre la métaphore d'Elianix, j'ignore si on peut se rapprocher facilement plus près pour mieux voir ).  [...] Oui, bien sûr, il doit exister des enzymes de restriction très spécifiques à l'homme (je ne suis pas sûr que ce soit suffisant. Distingueraient-ils des grands singes par exemple Plus d'info si un biologiste passe par là).  [...]

[Biotechnologie] An efficient TALEN mutagenesis system in rice

4. Miniprep the plasmids and confirm the correct colonies by repeating the restriction enzyme digestion, but the digestion time can be shortened to 510 min.  [...] Oui, carrément Surtout que la séquence insert est ici connue pour ne pas être sensible aux enzymes de restriction, donc à la digestion elle apparaîtra clairement.  [...]

Hydrolyse totale et hydrolyse partielle de l'ADN

je veux savoir quelle est la différence entre hydrolyse totale et hydrolyse partielle de l'ADN et on joue avec quels facteurs et merci bcp.   [...] Si vous voulez parler de digestions totales et partielle par des enzymes de restriction, alors c'est le fait de ne pas couper tous les sites présents en jouant sur la quantité d'enzyme et le temps de digestion. Sinon je ne vois pas.  [...]