• Santé - Digestion, ADN, Enzyme, Restriction

[Microbiologie] digestion de plasmide

j'ai digéré mon plasmide pbluescript avec ECOR I le problème c'est que je me suis rendue compte après que le tampon OPA seul avec le plasmide sans Enzyme provoque une digestion de ce dernier donc le tampon contient des endonucléases sachant que je ne peux pas jeter le tampon parce que sinon je dois patienter 3 mois pour recevoir la prochaine commande une dilution de tampon serait elle efficace pour se débarrasser des nucléases Même si je sais que ce n'est pas la bonne solution.  [...] Si dans le tampon que tu as utilisé y a des nucléases, tu peux balancer ta restriction que tu as faites (car ton ADN est coupé dans tous les sens) et la refaire avec un tampon plus adapté. Si je me trompe pas, un bête tampon H fera l'affaire pour une digestion EcoRI de pBluescript (le tampon est fourni avec l'enzyme).  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

Ensuite, une fois que tu as tout ça, tu transformes pour voir des phénotypes associés à des mutations, des sauvetages de phénotypes ou ce que tu cherches De toute façon, tu conserveras ton ADN en tube après son extraction, pas dans des cellules.  [...] Pour cela nous allons suivre un procédé décrit par Bento Soares en 1994, la normalisation des banques d'ADNc par cinétique d'hybridation. (5). Cette technique se base sur le fait que, plus un ADN déterminé est présent dans une population d'ADN et plus rapidement, après dénaturation il sera ren aturé.  [...]

microbiologie - CARTE DE RESTRICTION

Voilà, je n'ai jamais suivi de cours de bio depuis le lycée, et mon prof me demande de faire une carte de restriction sans m'expliquer ce qu'était le phénomène. une digestion de restriction, un adn plasmidique circulaire, bref j'ai dû mal à me représenter de quoi il s'agit.  [...] prends ton plasmide et effectue des digestions avec une enzyme de restriction particulière (eco R1 par exemple) ensuite fait ton gel et fait migrer ton produit de digestions.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzyme de restriction

J'ai un problème avec une digestion d'ADN amplifiés par PCR par l'enzyme de restriction Mnl1, une bande supplémentaire que je n'attendais pas apparaît, alors que ma PCR est spécifique et n'est pas contaminée. Mes réactifs de digestion non plus ne sont pas contaminés, j'ai vérifié avec le blanc de PCR.  [...] Il existe une site de restriction cryptique dans votre séquence. Il n'est pas absolument le site de restriction mais est pourtant reconnu par l'enzyme. Ce serait quand même étonnant que l'efficacité de coupure soit grande.  [...]

électrophorèse sur gel d'agarose

J'ai eu les résultats de la digestion et j'observe dans chaque cas 2 bandes. pour le plasmide non digéré j'ai une bande claire puis une bande foncée. et pour le plasmide digéré, j'ai d'abord la bande foncée puis la bande claire.  [...] Pour le BET c'est bien le cas, je suppose que c'est pareil pour les autres intercalants de l'ADN. Par contre cette relation marche t'elle que pour les fragments linéaires Une bande correspondant a un plasmide surenroulé ne devrait-elle pas être moins intense du au fait que certaines bases de l'ADN soit inaccessible du a la topologie de l'ADN ou alors est-ce négligeable.  [...]

[L1 BIO] TP Biologie moléculaire

Puis après on décide de faire une carte de restriction,en faisant une digestion enzymatique par l'enzyme de restriction xho1,cette enzyme se trouve de base dans le plasmide recombinant et aussi dans la séquence de l'ADN de la GFP mais pas dans celui de la Dsred.  [...] Alors que dans la sequence d'ADN de la GFP on nous dis que le gène se trouve à la paire de base n°421,en ajoutant les paires de bases entre lesquelles mon gène code je trouverais un site de restriction à peu près a 651 paires de bases.  [...]

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

Pour t'amener sur la bonne réflexion. sais-tu si l'ADN de ce virus est linéaire ou circulaire As-tu la carte du génome qui te montrerait les sites de restriction dudit génome.  [...] Tu as l'air de savoir ce qu'est une enzyme de restriction et aussi de savoir interpréter une électrophorèse, je ne vois pas bien ce qui te bloque pour réussir ton exercice.  [...]

[Biologie Moléculaire] the Genome walking method

Etant sur un forum francophone, évitez de mélanger anglais et français dans vos messages. Faites au moins un effort de traduction si les informations que vous trouvez sont en anglais.   [...] 4) Les ligatures servent ensuite de matrice à des PCR, les amorces utilisées seront divergentes pour amplifier l'ADN circulaire.  [...]

Banque d'ADN

Pour effectuer une banque d'ADNg d'un organisme, si j'ai bien compris, il suffit de mettre l'ADNg en présence d'une enzyme de restriction et de vecteurs. Nous nous retrouvons alors avec un ensemble de plasmides contenant chacun un fragment d'ADN.  [...] Pour faire des banques de gènes, il faut passer par une banque d'ADNc (extraction d'ARN puis Retro Transcription). Cette technique a par contre le désavantage de sur-représenter les gènes très exprimés dans la banque, et de posséder seulement certains patterns d'épissages (en particulier les patterns cellule-spécifiques).   [...]

[Biochimie] enzyme de digestion-restriction

q'elle est la difference entre l'enzyme de digestion ( utilisé avant la technique PFGE) et l'enzyme de restriction.  [...] nb. dans mon travail l'enzyme de digestion est I-CeuI,  [...]