• Santé - Detection, Protéine, Cellule

[Biochimie] Les Tag en biologie moléculaire

L'idée c'est d'accrocher à ta protéine recombinante quelques chose d'utile. ça peut être une séquence qui va coder pour de la fluorescence (détection de ta protéine recombinante dans la cellule par ex), pour un affinity tag (qui va te permettre par exemple d'isoler ta protéine recombinante par une chromato d'affinité), une séquence en Cys-Cys-Pro-Gly-Cys-Cys, qui permettra l'utilisation de FLAsH ou REAsH, un tag qui va modifier la solubilité de ta protéine, un His tag (tag constitué de plusieurs histidines),  [...] .. enfin, n'importe quelle séquence plus ou moins courte qui te sera utile pour tes recherches, que ce soit détéction, purification,  [...]

[Biochimie] qPCR :

Sachant que je sais que cette proteine est exprimée dans l'organe d'où j'ai extrait l'ARN, et que mon ARN (et mon ADNc) est de bonne qualité, je ne comprends pas pourquoi au bout de la 3eme paire de primers designées j'arrive toujours pas a amplifier mon gene d'interet.  [...] Si tu as accès à ce type de matériel, il pourrait être intéressant d'essayer un western blot sur tes cellules (détection de la protéine) ou un northern blot (détection des ARN).  [...]

Informations sur ce fameux test vih - Page 7

Pour être plus précis, le VIH détecte les cellules qu'il peut infecter. Cette détection est faite à l'aide d'une protéine, que notre corps reconnait comme antigène. Sans cette protéine intact, le VIH ne reconnait plus ces cibles (dont entre autre les Lymphocyte CD4+), et est donc voué à la mort.  [...] S'ils sont tous infectés et si plus aucune cellule infectée ne remplit plus sa fonction, c'est le stade SIDA et ça implique forcément un état physique et biologique de l'individu concerné détériore (il va par exemple, être très très très malade et ça va se voir).  [...]

[Biotechnologie] Pourquoi utiliser un FRET pour la détection d'une protéine

je sais j'ai déjà posté un message à peu près similaire mais je n'arrive décidément pas à comprendre pourquoi on utilise deux fluorophores. Par exemple, dans mon cas, je dois utiliser de la GFP et de la mcherry juste pour détecter la présence de protéine.  [...] Donne un peu plus de précision. Le FRET est utilisé pour déterminer la présence d'un fluorophore à proximité d'une autre fluorophore. Est-ce que ta protéine entre en interaction avec une autre protéine sur laquelle tu as mis ton autre fluorophore est-ce que ta protéine va être clivée entre tes deux fluorophores est-ce que tu t'intéresse au repliement spécifique d'une protéine Tout ceci sont des exemples qui sont principalement investigué à l'aide de FRET.  [...]

Les résultats déjà obtenus | Dossier

Coupe en immunohistochimie de myotudes (cellules musculaires) provenant de souris saines ou de souris mdx. La présence de dystrophine est révélée par un anticorps dirigé contre la partie terminale de la protéine. Le marqueur fluorescent rouge utilisé pour cette détection est la rhodamine.  [...] Des résultats publiés en janvier 2002 par une équipe américaine montrent qu'il est possible de supprimer des mutations du gène p53 dans des cellules fibroblastiques embryonnaires de rats (13). Grâce à une quantification précise de l'efficacité de suppression, mais aussi grâce à l'utilisation d'un test indirect de l'activité de la protéine p53, ils ont montré que les cellules traitées avec 200mg/ml de gentamicine, ou 800mg/ml d'amikacine possédaient une activité p53 significative.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de detection de ma protéine par immunofluorescence

voila j'ai transfecté mes cellules (HepaRG) avec un plasmide pcDNA3.1 Directional TOPO (Invitrogen) contenant mon insert d'intérêt (la protéase NS3 du virus de l'hépatite C). Ce plasmide contient aussi une tag V5, qui me permet (normalement ^^) de detecter ma protéine une fois exprimée dans mes cellules (grace à un anticorps anti-V5, Invitrogen).  [...] J'ai une question un peu bête mais as-tu vérifié que ta protéine de fusion NS3-V5 est bien exprimée dans tes cellules après transfection avec un simple SDS-PAGE Je n'ai jamais fait d'expression en cellules eucaryotes mais je suppose que c'est un peu comme pour les bactéries.  [...]

Un bras qui sécrète de l'insuline !

Un an après l'injection des cellules &beta., la régulation de la glycémie de la patiente semble être efficace, d'après les résultats publiés dans le journal The New England Journal of Medicine. Pour vérifier la provenance de l'insuline (des cellules du pancréas restantes ou des cellules réimplantées), le taux d'insuline a été mesuré dans les deux bras, après l'injection d' arginine (qui stimule aussi la production d'insuline).  [...] En plus de cette réussite, les chercheurs ont pu mettre au point une méthode de détection des cellules &beta. de sécrétion de l'insuline par une méthode non invasive. Ils ont utilisé un marqueur du récepteur du Glucagon-like peptide 1 (une protéine très exprimée dans ces cellules) pour révéler spécifiquement les cellules &beta.  [...]

Régulation ?

Pour une protéine donnée, une régulation allostérique est exercée par une autre molécule capable d'interagir avec elle, cette interaction modulant l'activité de la protéine.  [...] Toutes ces régulations permettent à la cellule, et dans le cadre de ton cours j'imagine que c'est ce que ton prof voulait établir comme lien, de détecter la présence ou l'absence de glucose/lipides/acides aminés ou de produits de leur métabolisme, qui vont interagir avec des protéines de détection et entraîner leur activation/inhibition via une régulation allostérique.  [...]

Un test urinaire pourrait suffire à repérer un cancer de la prostate

Concentration de sarcosine dans les cellules d'une prostate saine (gauche), atteinte d'une tumeur localisée (centre) et d'un cancer métastasé (droite). Crédit. Nature.  [...] La détection du cancer de la prostate se fait essentiellement par le dosage du taux sanguin de PSA. Cette protéine est normalement sécrétée par les cellules prostatiques mais son abondance peut être décuplée après l'apparition de cellules cancéreuses. Cependant, cette méthode permet difficilement de déterminer le niveau d'évolution du cancer, ainsi que sa capacité à développer des métastases ou non.  [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation du taux d'ARN mais non celui de la protéine

Maintenant, je te l'accorde, ces questions ne concernent pas le soucis de la détection de la protéine. Sachant que la protéine est détectée en WB dans le contrôle positif et négatif, ce n'est pas un soucis de détection.  [...] Je maintiens qu'il doit y en avoir un des deux qui foire quelque part. Si vous enleviez l'IHC on serait ok. Mais le problème c'est qu'elle est là. L'honneté oblige d'en tenir compte. Du coup la question qui se pose est. est ce que ce qu'elle observe en IHC n'est pas un artéfact La seule solution que je connaisse pour tester un anticorps c'est de faire la manip' sur une cellule/tissu n'exprimant pas la protéine cible.  [...]