• Santé - Cycles, Quantité, ADN

[Biochimie] Amorces ARN/ADN et Réplication/PCR

N'importe quelle extrémité 3'OH (ADN ou ARN) peut servir d'amorce pour les DNA polymérases. On utilise des amorces ADN en PCR parce que l'ADN est plus stable et plus facile à synthétiser que l'ARN.  [...] Ce sont des cycles de doublement de quantité. Après 1 cycle on a 2 fois plus d'ADN (2^1), au bout de 2 cycles, 4 fois plus (2^2), etc.  [...]

Probléme extraction ADN

Ca semble contradictoire, mais en fait c'est par titration des ions Mg2+ que ca inhibe la PCR. Si l'ADN est trop concentré alors il suffit d'augmenter la quantité de Mg2+ dans le tampon.  [...] tu as essayé de quantifier l'and contenu DANS ton produit pcr ca te renseignera ou se situe ton probleme (agarose, tampon de depot ou tampon de migration contaminés avec des dnases).  [...]

Normalisation RT-PCR quantitative

Pendant la phase exponentielle de la PCR, la quantité d'ADN double à chaque cycle, ce qui signifie qu'une différence d'un cycle entre 2 Ct correspond à une différence d'un facteur 2 des quantités initiales d'ADN cible. C'est le 1er delta de Ct.  [...] Mais le problème de la méthode des delta delta de Ct, est que c'est de la quantification relative, i.e. mon gène est n fois plus/moins exprimé que tel autre. Si tu veux faire de la quantification absolue, il te faut faire une gamme-étalon avec des quantités connues d'ADN et comparer le Ct de ton gène cible avec les Ct de la gamme.  [...]

[Biologie Moléculaire] quantitative/real time PCR quelle différence?

Merci pour toutes vos réponses. Si j'ai bien compris, la PCR en temps réel (après reverse transcription dans ce cas) repose sur la détection de la fluorescence à chaque cycle à l'aide d'un thermocycleur et elle peut être quantitative (normalisation de la quantité d'ARN de départ dans tous les échantillons, choisir un gène de ménage, réalisation de gammes.  [...] Oui, à condition d'etre en phase exponentielle d'amplification. Ex. dans mes PCRq, a partir de 35 cycles environ, il y a un plateau, et la quantité d'ADN est identique dans tous les points et indépendante de la quantité initiale. Impossible de quantifier en fin de PCR.  [...]

calcul d'une quantité d'ADN- PCR

Dans un échantillon de 1 microg d'ADN, on a 1pg de fragment à amplifier. Quelle quantité d'ADN amplifié obtiendra-t-on après 30 cycles de PCR, en admettant un rendement de 10puisssance 6.  [...] Le doublement de la quantité d'ADN à chaque cycle est une utopie qui n'a lieu que si l'efficacité de la réaction est optimale (100%). D'où les chiffres énormes que tu obtiens HigginsVincent. Si telle était le cas, nous nous contenterions d'une dizaine de cycles.  [...]

[Biochimie] Technique de PCR en temps réel

En revanche pour le graphe de droite je ne comprends pas, pourquoi plus les cycles augmentent et plus la quantité de molécules diminuent ça devrait être l'inverse logiquement non.  [...] Le cycle number correspond au nombre de cycles nécessaires pour que la quantité d'ADN atteigne un certain seuil. Ce nombre est lié à la quantité initiale d'ADN, puisque moins il y en a, plus il faut de cycles pour franchir la valeur seuil. C'est d'ailleurs ce qui fait que la PCR en temps réel peut être quantitative.  [...]

[Biologie Moléculaire] Déterminer la masse d'ADN dans une bande après électrophorèse

Sachant qu'on ne connaît pas la quantité d'ADN qu'on avait au moment de lancer la PCR, donc impossible d'appliquer juste la formule avec 2 puissance (nb de cycles).  [...] La question en elle-même est donc. comment faire pour déterminer la quantité d'ADn présente dans chaque bande du marqueur PM.  [...]

Gène de ménage (gène de référence...)

je crois qu'il y a des spécialistes de la qPCR sur le forum, donc, à voir pour plus de précision. Sur le principe, quand tu fais une (RT-)PCR, tu sais que la quantité d'ADN augmente avec le nombre de cycles, suivant une courbe en S, avec une phase exponentielle au milieu.  [...] A quel moment, c'est à dire à quel cycle démarre la phase exponentielle Cela dépend de la quantité initiale de matrice. Et c'est bien sûr ce que tu veux déterminer par rapport à un contrôle interne.  [...]

test garçon/fille comment ca marche?

Une PCR (réaction de polymérisation en chaîne) permet d'amplifier l'ADN. A partir de quelques brins, on va les dupliquer pendant une 30aine de cycles, et ainsi avoir beaucoup plus d'ADN. En effet, pour réaliser des tests ADN, on a besoin d'une certaine quantité.  [...] La quantité est sûrement suffisante pour utiliser une PCR. Je ne suis pas arrivée à trouver l'étude sur les 1 000 et quelques femmes, qui donne une réussite de 99%. Ou alors il fallait un abonnement payant.  [...]

[Biologie Moléculaire] RT-qrt-PCR : courbe de fusion et autres contrôles

Le principe, c'est que la vitesse d'amplification du produit (en phase expo) varie dans le même sens que la quantité d'ADNc présent dans l'échantillon. en quoi cela m'indique quel est le problème des dimères de primers et le rôle des différentes dilutions.  [...] Et maintenant la question qui t'aidera, quel peuvent être les facteurs pouvant affecter ce nombre de cycles (à part bien sur la quantité d'ADN initiale).  [...]