• Santé - Cycles, Décongélation, Cellules

[Biotechnologie] [licence]explication d'un article sur la culture cellulaire

En général, l'accumulation des métabolites cellulaires dans le milieu de culture est cytotoxique. En particulier l'acidification du milieu est particulièrement néfaste.  [...] pourquoi a-t-on utiliser des cellules hepatocarcinomes pour faire une culture cellulaire est ce par ce que c'est plus facileet qu'il n'y a pas d'homeostasie enter les cellules, donc les cellules se multiplie a leur gré et plus facilement.  [...]

préparation de mitochondries

l'un d'entre vous aurait il une idée de préparation de mitochondries à partir de réticulocytes Les cycles de congélation/décongélation sont trop durs pour mes cellules.  [...]

[Biochimie] Se débarasser de l'activité enzymatique résiduelle dans une cellule

Dans mon stage où je dois visualiser les profils d'acyles-CoA en LC/MS-MS, je dois traiter des culots de cellules de malade MCAD ( maladie où la protéine MCAD subit des mutations l'empêchant de dégrader des acides gras à chaine moyennes lors de la réaction de beta oxydation, et entrainant leur accumulation).  [...] Oui en effet après la culture des cellules, on les lyse par des cycles congélation décongélation et on travail sur les culots cellulaires qui contiendrons nos acyles CoA qu on veut visualiser.  [...]

Poumons artificiels : une transplantation réussie chez le cochon

Dans cette étude, ils avaient détruit les cellules d'un poumon de rat par plusieurs cycles de congélation-décongélation puis avaient utilisé cette carcasse pulmonaire comme support pour faire croître de nouvelles cellules. Cette fois-ci, ils ont atteint un stade supérieur jamais égalé en appliquant cette technique chez l'Homme.  [...] Pour parvenir à cette prouesse, les chercheurs ont utilisé les poumons de deux adolescents décédés à la suite d'un accident. Ils ont tout d'abord détaché les cellules pulmonaires de l'un d'eux par une technique identique à celle utilisée chez le rat. Des cellules saines ont ensuite été prélevées de l'autre poumon et placées sur ce squelette pulmonaire composé principalement d'élastine et de collagène.  [...]

méthodes de lyse

Je voudrais donc savoir si quelqu'un utilise d'autres méthodes (cycles congélation-décongélation, utilisation de détergeants) et si oui quels en sont les avantages et les inconvénients.  [...] Perso, je fais 3 cycles de congélation dans l'azote/décongélation à 37°C, et après centri, les protéines sont plutôt jolies... (WB par ex.).  [...]

[Biochimie] ARNm et résistance à la température

Les cycles de congélation ne sont pas bons du tout pour les ARN. La congélation/décongélation/sonication c'est pour les protéines, pas pour les ARN.  [...] Les acides nucléiques sont souvent dégradés par les cycles de congélation / décongélation, de par la formation des cristaux de glace. Après ça dépend du nombre de cycles dont on parle bien évidemment.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR positive puis négative

Si avec les gènes Qnr A et S, je n'ai aucun problèmes, les PCR destinés à mettre ne évidence QnrB me donne des résultats assez déroutants. Lors de ma première série de PCR, j'ai pu identifier un quarantaine de souches positives après dépôts sur agarose. Les produits d'amplification positif sont ensuite purifiés par exo-sap pour un séquençage du gène, avec les même amorces que celles utilisé pour la première PCR.   [...] Je pensais qu'il pouvait s'agir d'un problème du aux congélation décongélation ou à l'âge des échantillons mais ikls ont tous des âges différents et des cycles congélation-décongélation différents.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dmso

J'ai eu l'occasion de comparer des taux de survies cellulaires avec des cellules placées dans différentes conditions et on observait 25% de mortalité cellulaire avec un protocole classique (10% de DMSO dans le milieu de culture, décongélation rapide à 37°C), 30% de mortalité avec 10% de DMSO et une décongélation lente à température ambiante (20°C environ) et 20% de mortalité avec un mélange à 1% de DMSO et une décongélation rapide à 37°C.  [...] Compte tenu des grandes quantités de cellules travaillées, il est donc plus intéressent d'avoir un peu plus de casse à la décongélation mais d'avoir des cellules qui se divisent plus vite ensuite.  [...]

[Biologie Cellulaire] Effets de la congélation

lors d'un test sur des cellules de lignée NB4, nous avions avec mon groupe de TIPE comparer 4 cas avec les mêmes conditions de congélation et de décongélation en terme de vitesse, de gradient et de méthode de congélation (vapeur d'azote liquide à -80°C). On vérifiait après décongélation l'intégrité des cellules avec du bleu Trypan, un colorant qui normalement ne rentre pas dans la cellule.  [...] Mais cette économie de DMSO n'était pas si profitable que ça (d'où le fait que l'INSERM ne l'utilisait pas). en effet, quand on observe le temps de doublement de la population cellulaire juste après décongélation, on s'aperçoit que ce temps est plus élevé avec seulement 1% de DMSO.  [...]

durée de vies des spermatozoïdes?

Juste pour compléter ce qui a déjà été dit. L'étape la plus délicate lorsque l'on travaille sur des cellules congelée dans l'azote liquide (ou à moins 80), c'estla décongélation parce qu'on reprend les cellules dans du milieu de décongélation (milieu de culture additionné d'autres éléments) mais il faut faire attention à prendre uniquement le glaçon de cellules.  [...] C'est à dire qu'il faut essayer de décongeler les bords le plus vite possible pour récupérer un glaçon cellulaire qui va fondre dans le milieu de décongélation. Il ne faut pas attendre trop longtemps et récupérer un jus de cellules mortes (à cause de l'éclatement de la membrane par les cristaux).  [...]