• Santé - Courbe, Standard, ADN

Designer des Primers

Je fais des qRT-PCR et quand je fais ma courbe de standard avec de l'ADNc, ça marche très bien. Par contre quand je fais la courbe de standard avec de l'AND génomique, ça ne marche plus du tout. Jai des R values de l'ordre de 0,70. Le probleme c'est que mon boss veut que je fasse la courbe avec de l'AND génomique, je n'arrive pas vraiment à comprendre pourquoi. Quelqu'un peut-il m'aider.  [...] Je ne suis pas en Labo donc je ne côtoie pas ses techniques tous les jours. Juste je ne pense pas que quelque chose de spécial soit à faire, si ce n'est le protocole normal. Mettre des concentrations décroissantes d'ADN génomique dans tes 9 puits (ou 10 je ne sais plus) pour faire ta courbe standard.  [...]

[Biologie Moléculaire] qPCR - Analyses des résultats

J'utilise la qPCR pour dénombrer des lactobacilles dans un support. J'ai donc déjà réalisé une courbe standard (sur les données de Bio-Rad, j'ai slope = -3.429 y-int = 45.532 E =... R² =...).  [...] Comment je peux quantitfier mes nouveaux échantillons via la courbe standard que j'ai eu avant (càd. dans l'échantillon X, Ct = Y donc d'après la courbe standard, il y a Z bactéries dedans...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Efficacité PCR quantitative

J'ai besoin de lumière. lorsque je fais des manips de PCR quantitaive (absolue), il m'arrive parfois d'obtenir des pentes dans la courbe standard de l'ordre de -3.28, ce qui me donne une efficacité supérieure à 100%... Qu'est-ce que ça veut dire Pourtant, la courbe standard est nickel et il n'y a qu'un seul pic... Merci à ceux qui peuvent m'aider.  [...] Je réalise également en ce moment des Q-PCR et je dois reconnaitre que cette courbe standard, c'est completement du chinois pour moi.  [...]

[Biologie Moléculaire] Comment analyser les résultats de PCR quantitative???

est ce qq'un pourrait m'aider à comprendre la quantification relative des ARN par PCR temps réel avec courbe standard et delta Ct. J'ai rien compris à ce qui est écrit sur internet. c urgent. c la partie calculs que je comprend pas c kelle courbe et c kelle formule Je suis perdue je dois faire une présentation claire qui explique tout ça.  [...] Si tu parles de quantification relative, tu n'as normalement pas besoin de courbe standard (nécessaire à la quantification absolue par contre).  [...]

[Biochimie] B-Galactosidase d'origine vegetale

pour la precipitation tu dois utiliser le tableau avec les concentrations de sulfate d'ammonium c'ad combien de grammes de sulfate d'ammonium faut ajouter pour avoir 40% puis tu regardes a partir de 40% combien de grammes tu dois encore ajouter pour avoir 70%.   [...] 2- dosage de protéine et courbe standard par méthode de lowry et la méthode d'estimation de la consentration en protéines par mesure d'absorbance en UV.  [...]

[Biologie Moléculaire] QPCR, courbe Tm?

J'ai oublié aussi de dire que ma courbe standard de ref pour mon ARN (comparé à celle de GAPDH) n'est pas tip top et ne comporte que 3 points... cela peut il etre une des causes du problème pour la création des courbes pas le logiciel (ce que je doute ).  [...] la courbe donne quoi pour la gamme standard, est ce qu'en dessous d'une certaine concentration la courbe de fusion donne des produits aspécifiques.  [...]

ELISA courbe d'etalonnage

ok pour l'elisa sandwich mais pour l'indirect, il sert surtout à révéler des anticorps (ex dans le sérum) pour les doser c'est plus complexe car il te faut obligatoirement des solutions d'anticorps standard qui te permettront de calibrer le test et tu traceras la courbe A (on ne dit plus DO) =f(Ac) standard par exemple.  [...] J'ai fait un test ELISA en TP, et on ne nous a rien expliqué sur l'interprétation des résultats. Je sais déjà que je ne peux pas tracer de courbe d'étalonnage, car nous n'avons pas réalisé de gamme standard.  [...]

pcr quantitative et standard interne

J'ai compris le principe de la pcr (amplifier un fragment d'ADN ou d'ARN). Mais qu'est ce que la PCR quantitative c'est la taille du fragment amplifié que l'on veut connaitre, c'est ca et quel rapport avec la notion de standard interne (j'ai noté dans mon cours que le standard interne est un gène présent dans ttes les cellules et qu'il a pour but de corriger les erreurs O_O).  [...] Une PCR quantitative permet d'amplifier l'ADN et d'en déterminer la quantité. En utilisant un fluorochrome pour l'ADN amplifié, par exemple, on quantifie ainsi le nombre de réplicons. Le problème avec ce genre de technique c'est qu'il faut une base, un standard pour savoir ce que représente la quantité.  [...]

[Biochimie] Dosage de la phosohatase alcaline d'un sérum

Après la préparation d'une courbe standard de PNP, qui détermine la densité optique de différentes solutions de PNP, il est possible de doser l'enzyme d'un sérum.  [...] En soustrayant les deux DO, on obtient la DO du PNP seulement, qui est ratachable à la courbe standard. On peut alors déterminer la concentration de PNP dans notre tube.  [...]

[Immunologie] Comparaison impossible entre 2 lots anticorps secondaire polyclonal

Pour cela, nous effectuons une courbe standard en 5 points a partir d une préparation purifié de cette protéine pour laquelle ont connait la concentration. Sur le même gel se trouvent les échantillons a doser et un contrôle.  [...] pour cela, nous migrons 2 gels en parallèle (5 points courbe standard et 5 contrôle/gel). Nous utilisons ensuite le même anticorps primaire pour les 2 gels. Et ensuite pour un gel nous utilisons le nouveau lot et pour l autre le lot aactuel.  [...]