• Santé - Coupe, Plasmide, Restriction

principe de transformation des levures?

pour ceux qui est du plasmide l'introduction du géne se fait a l'aide d'enzymes de restriction spécifique qui coupe ton plasmide au niveau des séquence souhaiter et tu peux ainsi introduir ton géne.  [...] J'éspére que c'est clair et que c'est se que tu cherches mais mes connaissances en plasmide remonte de la fac alors désolé si c'est pas trop clair.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation

Ca fait deux semaines que je tente de faire une ligation entre pCLNCX et mon insert. J'ai coupé mon plasmide par HindIII et amplifié mon insert avec des amorces contenant le même site de restriction HindIII, la taille de mon insert est bonne. celle de mon plasmide aussi, il a bien été digéré car j'ai comparé le plasmide digéré ou non.  [...] est- ce - que tu as procédé à une déphosphorylation de l'extrémité 5' de ton plasmide digérée l'utilisation d'une phosphatase alcaline est necéssaire dans l'étape qui précède la ligation puisque tu utilises un seul enzyme de restriction... car au moment de ligation il va être plus facile à un plasmide de se recirculariser plutôt qu'intégrer une autre séquence.  [...]

génie génétique

On peut choisir de fabriquer un fragment dont chaque extrémité présente un site de restriction différents ET qui sont aussi sur le plasmide, comme ça le fragment ne pourra s'insérer que dans un sens qui est celui sur le plasmide de clonage. ok.  [...] donc en gros l'enzyme de restriction coupe le plasmide d'un côté et le fragment de restriction d'un coté, les autres cotés sont intacts et les coté coupés s'emboitent.  [...]

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

Merci pour votre réponse. (je connais mon cours et ca fait longtemps que je cherchais la réponse à ma question). ce que je ne comprenais pas c'est que dans mon énoncé on me parle d'un plasmide et non d'une cellule. on a digéré le plasmide pBR322 par différentes enzymes de restriction.  [...] Pourquoi parle-t-on de volume Si je coupe en un site de restriction unique, j'aurai une molécule linéaire, càd que mon plasmide circulaire du départ sera devenu linéaire. Là, il n'y a plus de considérations de topologie.  [...]

plasmide -digestion par enzymes de restriction

Je suis désolée mais je comprends pas ce que je dois faire... J'ai bien compris que si on coupe un plasmide circulaire via une enzyme de restriction il devient linéaire mais les extrémités c'est quoi.  [...] Effectivement, le nombre de N équivaut à ce qu'il y a de part et d'autres des sites de restriction. Tu peux donc déterminer le nombre si tu connais la taille du plasmide. Mais possèdes-tu ces informations.  [...]

Confirmation de l'insertion d'un gène dans un plasmide

Comme sur un gel d'électrophorèse par exemple. J'ai pensé à ca mais je ne suis pas très sûre du résultat, je devrai visualiser juste une seule bande, sachant que la taille de mon gène est de ~880pb et le plasmide que j'utilise est de ~7900pb donc en principe j'aurai une bande de ~8700pb. Est¬ce une méthode correcte.  [...] Oui c'est toujours comme cela que l'on fait d'ailleurs. On établit la carte de restriction du plasmide en utilisant des enzymes de restriction. A minima, une enzyme de restriction qui ne coupe qu'une fois permettra de linéariser le vecteur et d'en trouver la taille en faisant migrer le produit de digestion dans un gel d'agarose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzyme de restriction

Alors j'ai un plasmide qui fait 5858 paires de base et on nous dit que l'enzyme de restriction EcoR1 coupe a 1,a 948 et a 1582.On me demande de calculer la taille des fragments obtenus apres digestion du plasmide par EcoR1.Je me demande s'il faut soustraire a chaque fois du nombre total de paires de base du plasmide,le nombre de paires de base que coupe EcoR1Sachant que j'obtiens 3 fragments pour ce plasmide si je ne me trompe pas.  [...] oui c'est ca,c'est juste qu'il y a un troisieme site de restriction en position 1.Désolée,j'ai pas su etre plus claire.Je pense avoir compris le raisonnement,merci en tt cas.  [...]

[Biochimie] Restriction bizarre

- pourquoi n'avons nous pas obtenu les meme bandes, lorsque le plasmide n'a pas été soumit a une restriction (piste 1 et 4) alors que les conditions été iden,tiques et le plasmide censé etre le meme.  [...] et pour BGIII. minimum 2 bandes (si le site ou a été coupé le plasmide est un des sites de restriction de BGIII) ou 3 bandes. Mais ou ce placeraient elles sur le gel.  [...]

[Génétique] Construire un vecteur de transgenèse dérivé des transposons

Dis, pourquoi on coupe avec ces enzymes de restriction précisément est-ce que tu as sous les yeux la carte génétique du plasmide avec son MCS.  [...] Sinon, si tu veux orienter l'insert, tu coupes par deux enzymes de restriction. En tout cas, c'est ce qu'on nous a appris à l'école.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réactions in cis in trans

J'ai une présentation à faire sur un article scientifique (en anglais évidemment... elle part par gagnante ma présentation ) et on m'y parle à plusieurs reprises de réactions in cis et in trans. Pour replacer le sujet, il s'agit d'une enzyme de restriction de type IIF, qui coupe un plasmide supercoiled possédant 2 site de restriction pour la-dite enzyme.  [...] Oui il doit surement s'agir des éléments trans-régulateurs et des séquences cis-régulatrices, mais quelle est le rapport avec le plasmide et l'enzyme de réstriction, puisque ces élements sont impliqués dans le processus de transcription.  [...]