• Santé - Contrôle, Cellules, Positif

[Biologie Cellulaire] Induction d'apoptose 3T3

Si tu cherches pas un controle où les cellules sont spécifiquement apoptotiques et que tu veux juste un signal positif pour tes marqueurs de mort cellulaire (par ex si tu fais un marquage classique annexin V/PI) tu peux aussi congeler/décongeler un aliquot de cellules ca te fera des cellules nécrotiques.  [...] Encore juste une question. il se trouve qu'on ne dispose que de 2 cryotubes de cellules, et qu'on n'aura pas les moyens d'en congeler avant de commencer les manips (planning très serré et pas encore de congélateur -80°C), donc il sera difficile de sacrifier un de nos tubes pour faire le contrôle positif de la manip.  [...]

[Biochimie] Marquage cycle cellulaire et FACS

Je me demande quel controle positif utiliser pour faire ma compensation, j'entends un controle autre que mes cellules qui ne seront peut-etre pas assez marquees.  [...] Je m'interroge egalement sur l'analyse au FACS en elle-meme, j'ai l'habitude d'utiliser le FACS pour l'analyse de cellules GFP ou marquees avec des anticorps PE. APC, PERCP, ou FITC.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème avec mes transformations

J'ai réalisé la transformation avec des cellules E.coli XL1-Blue MRF. Les cuvettes d'électroporation sont des 2mm. Les conditions d'électroporation étaient de 3 kV et normalement pour avoir un bon rendement, il faut que le pulse dure 5 millisecondes [ms].  [...] Dans ce protocole on utilise 200 ul de cellules compétentes + 20 ul du produit de la ligation et comme autre transformation avec 60 ul du produit de la ligation.  [...]

[Biologie Cellulaire] Lipofectamine 2000 et antibiotiques ?

Finalement, les cellules ne sont pas mortes (je leur ai changé le milieu au bout de 4h hier pour limiter les dégâts) et la transfection contrôle par un vecteur GFP a marché (cellules vertes ce matin). j'ai peut-être un % moindre que d'habitude cependant.  [...] J'ai testé. cellules non traitées, mock transfection (=ayant subi le protocole de transfection, mais sans siRNA), contrôle positif (=GAPDH), contrôle négatif (acheté chez Dharmacon (comme le reste d'ailleurs)) et enfin siRNA test. Le tout en triplcat. J'ai suivi les recommandations de la firme pour débuter, soit 10nM final.  [...]

Détection de protéines mal repliées par western blot?

Notre idée de départ était de prendre comme contrôle positif de l'insuline normal et de le comparer à l'insuline issue des cellules infectées.  [...] Si ce n'est que pour une protéine, cela doit être possible de voir un changement de taille de la protéine en condition non dénaturante. Une protéine mal replié étant généralement plus grande que celle bien replié, elle migrera moins vite. Mais l'insuline est vraiment petit en taille, et je ne sais pas s'il est possible de voir clairement un tel changement de conformation.   [...]

[Biochimie] Complexe Hypotalamo hypophysaire

voila mon problème, les cellule de Sertoli s'écrête une hormone que l'on appelle l'inibine celle ci exerce un rétro controle négatif au niveau de l'hypotalamus est plus précissement au niveau des neurones qui s'ecrete une proteine appellé GnRH. Cependant on dit que quand le taux d'inibine et faible il y à une déficience de la spermatogénese il y à alors rétro controle négatif mais pourquoi NEGATIF et pas positif puisque le taux de GnRH doit augmenter tout comme la FSH pour donc stimuler la spermatogenèse.  [...] d'accord merci. c'est pour cela donc que l'on ne parle pas de rétro controle positif chez l'homme. Les cellules de Sertoli fabrique également un proteine l ABP je ne comprend pas sont role.  [...]

[Biologie Cellulaire] Besoin d'aide pour savoir quel test statistique utiliser

Quelques jours après je réalise des traitements (différentes doses d'une même molécule + contrôle négatif (solvant) + contrôle positif) en triplicat, que je renouvelle 3 jours après. 3 jours après le dernier traitement j'évalue l'effet des traitements sur la prolifération cellulaire (comptage des cellules).  [...] Concernant l'analyse des résultats, j'exprime mes données en pourcentage de mon contrôle positif. Je fais la moyenne de tous les triplicats sur plusieurs manips. J'aimerais savoir comment identifier si les différences avec le contrôle négatif sont significatives ou non (quel test utiliser ANOVA Mann-Whitney autre ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Contrôle négatif clonage

- controle positif. vecteur seul =. développement des cellules sur milieu sélectif, car le gene de sélection est contenu dans le vecteur qui est contenu dans les cellules.  [...] - controle négatif. pas d'ADN =. pas de développement des cellules sur milieu sélectif, car le gene de sélection n'est pas présent dans les cellules.  [...]

Marquage Annexine V/ PI Cytométrie: concentration cellulaire

A votre avis, dois-je re-suspendre chaque échantillon de façon à ce que chacun d'entre eux soit à une concentration de 10^6 cellules vivantes (ou vivantes et mortes non préférentiellement), ou devrais-je tous les re-suspendre dans le même volume (calculé par exemple à partir du contrôle positif), afin de conserver une idée de la proportion de cellules vivantes/mortes.  [...] La concentration que te donne le kit est pour un marquage optimal, à priori 10^6 cellules totales/ml pour faire ton marquage dans 100µl, s'il y a trop de cellules le marquage peut perdre en efficacité.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage dans le pGEM-T easy vector.

Déjà une chose, ça a pris plus de temps que d'habitude pour avoir des colonies. Le contrôle positif fait avec un de mes vecteurs et les cellules a donné des colonies après une nuit (normal). Pour mes plaques de transformation, j'ai du attendre 1 jour pour avoir des coloniees bien visibles.  [...] Encore une petite chose par rapport à l'Arc qui est arrivé lors de l'électroporation. Le background control de promega était ok, pas d'Arc. Par contre, LEUR contrôle positif avec les 2 ul de leur ADN à insérer m'a donné un Arc. Je ne comprends pas pourquoi vu que j'ai juste suivi le protocole.  [...]