• Santé - Contamination, ADN, Amorces

qPCR résultats hors gamme standard!!!

Si les 2 séquences sont identiques, fait une PCRq avec un couple d'amorces placé dans un intron pour contrôler le niveau de contamination par de l'ADN génomique.  [...] 3) Je réitère ma proposition d'estimer la quantité d'ADN génomique contaminant par un couple d'amorce situé dans un intron. C'est un contrôle de contamination et de niveau de bruit de fond imparable.  [...]

[Biotechnologie] L'ADN mystère !!!

s'il s'agissait d'une contamination de l'un des réactifs, on aurait cette même bande pr ts les autres puits, ce ki n'est pas le cas, celles des échantillons étant largemt + faibles. Et s'il sagissait d'une contamination entre tubes test et tube témoin, l'intensité aurait été plus faible ou au pire identik à celles des tubes test.  [...] Cmt est-ce alors possible il ne peut pa s'agir d'une contamination extérieure par de l'ADN ki serait com par hasard homologue à nos amorces spécifik à P.fluo. et de la mm taille que l'ADN attendu... Génération spontanée... mdr on C plu koi penser. Aidez-nous svp.  [...]

[Biologie Moléculaire] question de qPCR pratique avec exemple

-les deux amorces doivent elles etre les plus éloignées possible ou les plus proches possible (pour eviter la contamination avec l'ADNg ).  [...] Pour vérifier la spécificité des amorces, il faut savoir s'il existe d'autres gènes ayant une séquence proche du tien avec BLAST et vérifier que tu n'as pas positionné ton amorce dans des zones conservées (i.e. qui présente un fort pourcentage d'identité).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Pour la faible quantité. pas assez d'enzyme ou enzyme pas efficace, pas assez d'amorce, pas assez d'ADN, contamination des échantillons, machine à PCR dérègler.  [...] J'ai oublié (mais mes énumérations ne sont pas exhaustives.). si la température d'hybridation des amorces est trop basse ( = stringence diminuée), l'amplification est moins spécifique aussi.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR en temps réel ou Q-PCR

Mais normalement, mes amorces de Q-PCR ne devraient-elles pas donner un produit de taille différente quand je fais un PCR sur du génomique et sur de l'ADNc Pourtant dans mon cas les deux produits obtenus ont le même poids, ce qui est fou. Je me demande si je loupe un train dans la compréhension de la technique ou si il s'agit simplement d'une contamination.  [...] Sinon, oui les produits des PCR de l'ADN génomique et ADNC devraient être différents... mais normalement, si tu as bien mis ta DNAse avant la RT, pas de contamination possible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux bandes en PCR

On a du mal a expliquer ces résultats. Notre théorie c'est que les amorces étaient contaminées avec d'autres amorces. Il peut aussi y avoir un problème dans les dillutions des Amorces. Est- ce qu'un problème de dillution peut expliquer ce résultats.  [...] Alors pour la théorie de la contamination ce sont des amorces utiliséees pour essentiellement faire des TP avec des étudiants donc une contaminations par d'autres amorces peut ètre possible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

Si c'est une extraction d'ADN plasmidique, la présence d'une pelote ou de longs filaments témoignent d'une contamination des plasmides par de l'ADN génomique bactérien. Quel est ton type d'extraction d'ADN. ADN total ou ADN plasmidique.  [...] Personnellement j'ai extrait de l'ADN génomique du soja par les méthodes classiques basées sur l'utilisation de détergent (CTAB et SDS ) par deux protocoles différents et dans les deux cas j'ai obtenu un précipité sous forme d'écaille. je n'ai pas compris qu'on est-ce que on obtient une pelote d'ADN et quelle est la relation entre la forme et le degré de contamination de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination d'amorces

Nous avons de suite pensé qu'il s'agissait d'une contamination de l'un des réaactifs. Nouvelle PCR en changeant de l'eau pure. même résultat. une autre pcr mais cette fois ci en remplacant 'Mytaq'par un autre tube nouveau. le témoin donné toujours de bandes.  [...] Ce qui reste c'est les amorces. Durant j'avais trois amorces que je les tester,ont toutes donné une contamination au niveau du témoin NEGATIF, et ce qui m'étonne plus que le profil du contaminant ca diffère d'une amorce a l'autre.  [...]

[Génétique] Inconvénient de la PCR

C'est pour ça qu'il est nécessaire de faire contrôle négatif (= mettre tous les réactifs, sauf l'ADN) pour s'assurer qu'il n'y a pas eu de contamination.  [...] Les contaminations arrivent vite, car une très petite quantité va être amplifiée en même temps que le fragment d'ADN d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN génomique

moi j'utilise le quick yeast DNA PREP et j'ai toujours des problèmes soit contamination par l'ARN soit j'arrive pas à digérer l'ADN.  [...] j'ai un protocole super simple et tres rapide, mais ca ne différencie pas l'ADN de l'ARN. Si tu es géné par une contamination ARN pourquoi ne pas mettre de la RNAse dans ton tube.  [...]