• Santé - Conservation, Sang, Total, ARN, Rendement, Extraction, Période

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs.  [...] J'aimerai demander si la conservation du sang total à -4 ou -20C affecterait les ARNs circulants et le rendement de l'extraction de ces derniers et si vous pouvez m'indiquer la période et la température optimale de stockage/conservation des prélèvements sanguins qui permet de préserver les ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ARN

J'ai essayé plusieurs protocoles d'extraction d'ARN car je travaille sur l'ARN circulant plasmatique et j'essaye d'optimiser mon rendement d'ARN avant d'agir sur la contamination par les sels ou le phénol.  [...] Juste pour vous dire que j'ai retenté une extraction d'ARN en faisant un lavage supplémentaire au chloroforme et mon rapport DO 260/230 est passé de 0,4 à 1 donc nette amélioration. J'ai dû cependant compenser la perte de rendement d'ARN en partant d'une quantité d'échantillon de 30% supérieure.  [...]

[Biologie Moléculaire] Meilleure technique d'extraction ?

Pour l'extraction nous utilisons un kit qui donne un bon rendement et de l'ADN assez propre, mais la nouvelle responsable du service nous le déconseille, en disant que l'extraction phénol-chlorophorme nous permettra une meilleure conservation de l'ADN.  [...] Perso, je faisais une extraction phénol-chlo après les étapes de déplétion (je travaillais sur du sang total) et puis, plusieurs amplification de génomes totaux de pathogènes avant d'hybrider sur la puce.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction ARN

L'extraction phénol/chlorophorme ne permet pas de discriminer les ADN des ARN, quoiqu'il doit exister des protocoles suffisament précis pour optimiser le rendement en ARN.  [...] Le gradient de césium est bien plus précis et à mon avis on peut le faire après l'extraction phénol/chlorophorme, pour augmenter la pureté de sa préparation d'ARN.  [...]

Extraction d'ADN bactéries lactiques

Je cherche un bon protocole d'extraction de l'ADN total des bactéries lactiques. je voudrais savoir aussi par quelle technique obtient-on un bon rendement et une bonne qualité d'ADN.  [...] l'ancien protocole (lyse enzymatique) me semble très long, mais est il efficace ou l'utilisation des kits est meilleure.   [...]

[Biologie Moléculaire] ADN ARN extraction

J'ai un petit problème en TP de biologie moléculaire, c'est lors de l'extraction de l'ADN et de l'ARN. Ma question est. pourquoi l'ADN, à pH basique se retrouve en phase aqueuse, et pourquoi l'ARN se retrouve en phase aqueuse (tous les 2 lors de l'extraction bien entendu).  [...] Attention. pour faire des extractions d'ARN, il faut un phenol acide, et pour l'ADN un phénol tamponné. Si tu prends un phenol acide pour une extraction d'ADN, tu as un rendement très bas, car l'ADN reste dans le phenol et non dans la phase aqueuse.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

j'ai testé plusieurs protocole d'extraction d'ARN (kit RNeasy, Chang et Al 1993, Reid et Al 2006) mais je n'obtiens pas un grand rendement (200ng/uL et en faisant 8 répliquat par échantillons j'obtiens au mieux 10ug...) Il m'en faudrais bien plus car après je dois synthétiser des cDNA et là il me faut 100 ng minimum d'ARNm.  [...] Au début du protocole de chang et Al, on doit incuber 10-15 min à 65°C, peut etre faut -il incuber plus longtemps, 30-45min (je reste sur ce protocole car kit presque épuisé, et protocole de la vigne= Reid et Al =contamination ADN avec un traitement à la DNAse...).   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN

Je suis entrain d'optimiser une extraction d'ARN chez le chêne Liège. J'ai essayé un kit commercialisé mais la pureté et le rendement en ARN est très faible. J'ai trouvé ds un article un kit maison, il utilise du glycogene pour précipiter l'ARN. Est ce que qlq'1 connaît un autre produit pour substituer le glycogene.  [...] J'utilise normalement soit trizol ou des kits commercialisés mais c'était pour des plantes herbacées. C la première fois que je travaille sur le chêne.. J'ai fait une première extraction avec un kit auquel j'ai ajouté au début du PVP mais j'ai eu un rendement très faible avec un ratio 280/260 et 230/260 a peine 1.4.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

1) J'ai des ARNs que je voudrait nettoyer. La DO 260/280 est bonne (. 2) mais je suis apparemment contaminé par les sels du tampon RLT (extraction sur colonne) puisque ma DO 260/230 n'est que de 1,3. Est-ce que vous pensez que ça peut poser un problème pour les envoyer en Q-RT-PCR Et si oui, pour éliminer ces sels, est-ce qu'une simple précipitation à l'isopropanol (+lavages à l'EtOH) suffirait.  [...] Sinon tu peux les repasser sur ta colonne d'extraction, par contre, tu risques de perdre au niveau rendement d'ARN alors tout dépend de ta concentration. Si tu précipites à l'isopropanol, tu risques également de perdre de l'ARN mais si il t'en reste suffisamment pour réaliser une RT PCR ça devrait aller.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction faible qté ARN

Salut. j'utilise habituelement l'extraction phenol/chlorophorme et glycogene pour extraire les arn des mes cultures cellulaires.. et le rendement est amliore, pas de facon faramiseuse, mais il y a une difference qui justifie l'achat.  [...] Nous sommes un labo qui travaille de façon quotidienne avec de l'ARN (transcrits in vitro, extraction d'ARN, etc) et nous n'utilisons jamais de DEPC, juste des solutions autoclavées. Même les bacs à gels traînent à l'air libre, sans nettoyage. Il n'arrive qu'extrêmement rarement des dégradations, et d'habitude c'est dû à une contamination accidentelle de notre faute.  [...]