• Santé - Conditions, Protocole, Fournisseur

Ligation/plasmide

Pour la ligation, dans les conditions optimales. proche de 100%. A noter que les conditions optimales ne sont pas nécessairement celles inscrites sur le protocole du fournisseur de la ligase.  [...] Pour la transfection Calcium-phosphate, c'est un peu plus variable. très efficaces dans des lignées mammifères types HEK293 (jusqu'à 95%), moins efficaces pour d'autres. Pareil, ce mode de transfection doit être optimisé pour bien fonctionner.   [...]

Immunohistochimie

- Appliquer l'anticorps secondaire (le protocole dépend du fournisseur) et appliquer le protocole standard d'immunohistochimie (HRP  Peroxyde  DAB).  [...] Après, pour avoir des protocoles précis, il faut voir les fabricants d'anticorps, d'automates et les adapter au désidératas du lecteur... Mais dans les contexte actuel avec les velléités d'accréditation, je suis convaincu qu''il ne faut pas chercher à jouer les apprenti sorcier et se fier au fabricants qui sont eux certifiés IVD et surtout de proscrire les techniques manuelles (à regret...).  [...]

[Biologie Moléculaire] transfection lipofectamine LTX and PLUS reagent invitrogene

Pour la transfection en elle-même, les lipides cationiques restent relativement toxiques pour les cellules, et les fournisseurs de réactifs de transfection sont bien souvent vagues, là où certains n'en parlent même pas, sur la notion d'optimisation de la quantité de Lipofectamine et d'ADN à utiliser lors des transfections.  [...] je transfecte en Opti-MEM comme indiqué sur le protocole du fournisseur et dans les quantité prescrites par le fournisseur. j'ai déja essayé une gamme de lipo mais ayant oublié de changer le milieu au bout de 4h j'ai pensé que la mort cellulaire que j'obtenais venait de là.  [...]

[Immunologie] Isotype en cytométrie

Il faut tout prendre en compte, espèce, fluorochrome, IgG2a, b etc. pour aller plus loin il faut également que l'isotype provienne du même fournisseur (protocole et qualité du couplage).  [...] A cause de toutes ces considérations, les isotypes sont rarement utilisés correctement et peux informatifs. Il vaut mieux se battre sur le choix des fluorochromes en fonction de votre panel et de l'expression des marqueurs.   [...]

Particularités membranaires des lysosomes

Nous nous servons du lysotracker pour suivre les granules des lymphocytes (assimilables à des lysosomes sécrétoires qui au passage ont pas mal de protéines de la famille munc). Et aucun pb de protocole, nous suivons celui recommandé par le fournisseur.  [...] peut etre que la dose et le temps d'exposition ne sont pas physiologiques, est ce qu'il ya une autre methode qui permet d'identifier la colocalisation de cette proteine au niveau des lysosomes et est ce que vous savez un protocole pour faire sortir les lysosomes au niveau de la membrane.  [...]

Conditions d'une culture cellulaire animale

Bonjour, je voudrai vérifier l'authenticité de ma réponse à cette question. Dans quelles conditions s'effectuent la culture cellulaire.  [...] Pour conclure, vous énumérez des règles générales justes, mais, il ne vous faut pas oublier qu'il faut impérativement adapter les conditions de cultures à ce que vous souhaitez faire pousser (par le biais des recommandations de votre fournisseur ou grâce à votre propre expérimentation), sinon.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR récalcitrante

Pour l'instant je bosse avec la Dream Taq DNA pol (mise au point de la PCR avant utilisation de la Phusion) en suivant le protocole du fabricant Thermo Scientific (mais en faisant mon mix, je n'ai pas le master mix de Thermo Sc.).  [...] En règle générale, quand je fais une PCR, j'utilise toujours le Tm calculator de mon fournisseur avec la polymérase aue je compte utiliser et je suis à la lettre le protocole fourni. Ça fait quand même un bon bout de temps que j'ai eu une PCR récalcitrante (même si ça peut arriver).  [...]

[Biologie Moléculaire] Fragment de Klenow - glace- séparation brins

Cette étape de glace n'est pas indiquée dans la notice du fournisseur, cependant, elle est retrouvée dans des protocoles similaires utilisant la T7 DNA Polymérase ou la Sequenase ( https.//en.wikipedia.org/wiki/T7_DNA_polymerase ) utilisées dans le même but.  [...] Ma question est donc de savoir si la Klenow va bien réussir à avoir accès au premier brin d'ADNc pour synthétiser le second, c'est-à-dire s'il n'y a pas un risque de réhybridation des brins ARN matrice-ADNc lorsque je sors mes tubes du thermocycleur (et qu'ils restent quelques minutes à t° ambiante).   [...]

[Biotechnologie] verification de la performance des micropipettes

Il y a plusieurs protocoles. Le fournisseur ne précise rien Sinon dans le principe vous pouvez prélever plusieurs volumes d'eau et peser la masse de ces derniers. En connaissant la masse volumique de l'eau vous trouverez le volume vrai et pourrez comparer celui-ci au volume supposé indiqué par la micropipette.  [...] A noter qu'il faut aussi prendre en compte la température de la pièce et du volume (dilatation) ainsi que dans le cas de la gravimétrie de la pression barométrique. Et que les résultats sont normalement répétés 10 fois sur au moins 3 volumes (max, min, volume intermédiaire) permettant ainsi aussi de connaitre la répétabilité de la pipette.   [...]

Amorces Eurofins vs invitrogen un vrai casse tête que

je tiens a préciser que la seule chose qui a changé est le fournisseur, avant je me suis servis des vieux primers de chez invitrogen et après on a changé de fournisseur, c'est chez Eurofins maintenant,j'ai vérifié la commande pour exclure d'éventuelles erreurs de frappe lors de la commande, j'ai fait une PCR avec des témoins positifs ( des échantillons qui ont déjà marché avant ) et rien, j'ai recommandé les mêmes primers pour la deuxième fois et toujours rien.  [...] Ps. j'ai appelé le fournisseur et il disent que y a pas d'erreurs sur leur processus de synthèse ils m'ont renvoyé d'autre amorces et ils ont modifié l'échelle de synthèse et ont purifié et tjs rien.  [...]