• Santé - Concentré, Tampon, Protéine

[Biochimie] Concentré une protéine recombinante

J' ai fait plusieures purifs d'une protéine recombinante de 7 kDa. Elle se trouve dans un tampon Imidazole 500 mM. Je voudrai maintenant la concentré et la passer dans un tampon 50 mM phosphate. Question. est il possible de faire d'une pierre, deux coups et Quels sont le méthodes éfficaces pour concentré et /ou changer le tampon d'une protéine de 7 kDa.  [...] Pour concentrer les protéines, il existe des filtres de porosité donnée (je ne sais pas s'ils descendent en-dessous de 10 kDa), qui permettent d'éliminer la quantité voulue de tampon tout en retenant la protéine. On a donc bien une augmentation de la concentration de la protéine.  [...]

[Biochimie] Calcul de concentration de la protéine dans un échantillon (Exo L1)

le tampon de stockage utilisé et les autres acides aminés présents dans la protéine n'absorbent pas signifcativement la lumière UV à 280 nm.  [...] concernant la dernière question, je pense que tu devrais prendre en compte la formule liant le pH au concentration d'acide de base et de protons.  [...]

[Biochimie] tris-HCL

j'aimerais savoir pourquoi on utiliser toujours du tampon tris HCL pour diluer les protéines et pas un autre tampon style PBS. Quelle est la fonction du tris HCL sur les proteines.  [...] Generalement je concentre ma proteine et change le tampon directement apres elution par centrifugation sur colonne (microcon ou autre). Je m'arrange aussi pour concentrer ma proteine au minimum 100x. Comme ca quand j'ai au max 0.5% de glycerol final.  [...]

Problème de migration SDS-PAGE

L'expérience consiste, dans un premier temps, à dénaturer les protéines dans de l'urée 8M + DTT 5mM, puis à les renaturer par l'utilisation d'un tampon (TrisHcl, NaCl et EDTA), une centrifugation est ensuite réalisée, le surnageant correpondant à ma fraction soluble est concentrée par evaporation et mon culot correspondant à ma fraction agrégée est resuspendu dans un peu de tampon de dénaturation (Urée 8M + DTT 5mM) et Laemmli Buffer 5X.  [...] il semble que j'ai résolu le problème qui n'était autre que l'urée... En effet je dénature avec de l'Urée 8M puis renature avec un tampon (TrisHCL, NaCL, EDTA) puis je concentre ma protéine par evaporation, l'urée reste donc à trés forte concentration à la fin de l'évaporation.  [...]

lyse des cardiomyocytes par tampon de lyse et dilution du lysat cellulaire en protéine

J'ai lysé mes cardiomyocytes par le tampon de Karla j'ai mis 1ml par puits d'un plaque de 6 puits mais proteinés sont diluées dans le tampon de lyse je ne sais pas comment les concentré.  [...] Même si le culot n'est pas visible, il y en a souvent un - j'ai fait des centrifugations et redilutions d'amorces ADN à la chaîne fut un temps.   [...]

[Biochimie] migration sds page

Si tes protéines migrent effectivement plus lentement que tes marqueurs ce n'est pas un problème de montage électrique ( ou de voltage/ampérage) mais un problème au niveau du resolving ou d'un tampon de charge trop concentré en glycérol.  [...] je viens de recommencer un gel en diminuant la concentration en glycérol, en prenant de nouveaux produits (acrylamide, tampons avec le bon pH, b-mercaptoéthanol...). La migration est un peu meilleur mais mes protéines ne dépassent toujours pas la moitié de mon gel de séparation alors que mes marqueurs et mon front de migration sont OK.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

En gros pour faire c que tu veux faire, il faut un tampon classique d'extraction (Tris, Nacl, Triton, quelques inhibiteurs de phosphatase et de protéases). La difficulté est due a la taille de la FAS (230kDa je crois) donc il faudra faire un gel peu concentré (genre 8%) pour celle la et un plus concentré pour IR (10 ou 12%).  [...] Ton protocol m'abeaucoup aidé. J'ai extrait mes proteines et fais mon dosage de Bradford. Par contre, jai un soucis, mes proteines sont très concentrées. Du coup, pour avoir les 20µg qu'il faut pour le gel, j'ai des valeurs negatives. Que faire dans ces conditions Estce que je peux diluer mes ech Et si oui, comment pourrais-je les quantifier a la fin.  [...]

Conséquence de la concentration d'un tampon électrophorèse sur l'intensité

Or, pour moi, le TBE 10X et 20X, ce sont des tampons 10 et 20 fois plus (+) concentré que le TBE 1X (de référence). Alors je ne comprends pas comment tu peux diluer du TBE 10X en TBE 20X.  [...] Pour obtenir une tension de 90 V j'ai dilué le tampon concentré 10X (fourni avec le kit) au 20ème(conctration finale 0.5X TBE) Avec cette nouvelle concentration l'alimentation limitée à 30mA disjontait immédiatement.  [...]

colonne de Nickel et Tampon phosphate

mon problème est que dans ce tampon ma prot ne supporte pas la concentration avant chrommato d'exclusion, elle perd enorémént d'activité. dans la littérature j'ai trouvé que cette prot recombinante (venant d'autres organismes mais présentant un fort pourcentage d'identié avec la mienne) se concentre bien en tampon phosphate.  [...] Le tampon phosphate permet de forcer un peu le binding des proteins reticentes... En fait le binding sur Ni se fait plus facilement, mais tu te retrouves souvent avec beaucoup de non-specifique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de Taq polymérase.

Je pense qu'il y aura qu'en même une amplification mais qui sera moins forte que si j'avais mis la bonne concentration en Taq car y aurai compétition.  [...] Je dirais tu auras peut être plus d'amplicons si tu n'as pas optimisé cet aspect de ton mix PCR, à part ça... Normalement la TAQ n'agit qu'après être fixé sur un double brin d'ADN donc la compétition je vois pas trop. Tu veux dire plusieurs Taq essayant de se fixer aux mêmes sites.   [...]