• Santé - Concentration, Gamme, BSA

[Biochimie] Dosage de protéine

Après de nombreuses recherches, je me tourne vers vous pour essayer de mettre au point un protocole de dosage de protéines. Je dois doser les protéines contenues dans une fraction purifiée d'un surnagent de bactéries marines et je ne sais quelle méthode choisir (Lowry, Bradford, spectro UV.   [...] ..). De plus, je n'ai aucune idée d'une concentration approximative dans ma fraction et je ne sais pas du tout sur quelle gamme étalon je dois partir en terme de concentration de BSA.  [...]

[Biochimie] TP activité de la phosphoénol pyruvate carboxylase, calcul vitesse initiale

Du coup je vais calculer la vitesse en concentration (micromol/L) par minute et je convertirai cette concentration en nmol pour avoir l'activité du NADH en nmol/min et donc avoir celle de la PEPcase.  [...] J'ai calculé au préalable avec une gamme étalon de la BSA la concentration protéique pour chacune des deux espèces végétales mais je comprend pas ce qu'il faut faire pour calculer l'activité spécifique de la PEPcase.  [...]

[Biologie Cellulaire] Extraction protéique pour western blot

.. Alors pourquoi ne pas lui indiquer tout de suite la marche à suivre, et le laisser être créatif quand il maitrisera la technique Bien évidemment, maintenant, je fais ça sans doser car je sais à quelle concentration je m'attends, mais c'est après avoir automatisé la technique.  [...] MaliciaR. je sais comment calculer des volumes (heureusmeent quand même arrivée en Master 2.. ) ma question portait plus sur les composants et les concentrations du tampon de lyse, ainsi que les étapes à effectuer.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Pour bien faire les choses, tu devrais réaliser ta gamme BSA étalon dans le tampon d'extraction, comme ça plus de problème avec la BSA du tampon.  [...] une solution serait de faire une extraction témoin sans échantillon que tu utiliserais pour faire la gamme, mais je n'ai aucune idée de si la quantité qui sera présente aura un impact sur le dosage.  [...]

role de la BSA dans la mesure de la concentration des protéines !!

Determination of Total Protein Content. Total soluble protein was measured according to Lowry et al. [25]. Protein concentration was determined using bovine serum albumin (BSA) as a standard. The protein content of the chromatographic eluant was measured by monitoring the optical density at 280 nm.  [...] wé ta bien répondu sur ma quetion. seulement pour fixer les idées, les concentrations de la BSA sont utilisées comme gamme d'étalonnage. ensuite la valeur de la DO mesurée est projectée sur l'axe des abscisse. c'est bien ça.  [...]

[Biochimie] méthode de BRADFORD

Ensuite tu fais ta gamme, tu verras vite de toute maniere si tu es completement a l'ouest la couleur bleu doit apparaitre assez vite pour les concentrations les plus élevées. Tu attends 5-10mn et tu prends la DO. (a verifier mais il me semble que la gamme que nous faisons classiquement est 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20, 30 micro grammes).  [...] Merci de m'avoir répondu. Mais en fait, je suis dans la zootechnie, et j'ai à determiner les concentrations en protèine d'ordre de microgramme (glandes hypopharyngiennes des abeilles) et je ne sais pas quelle concentration BSA à utiliser pour tracer ma courbe d'étallonnage autrement dit comment je dois préparer la solution mère (quantité de BSA en poudre et la quantité d'eau distillée).  [...]

calcul de concentration

je souhaiterai savoir comment calculer la concentration en protéine (mitochondries) à partir d'une courbe étalon avec la BSA.  [...] Avec l'équation de la droite de régression, tu peux touver la quantité de protéine dans ta prise d'essai (5 ou 10µL) et donc ta concentration.  [...]

[Biochimie] Chromatographie d'exclusion sur colonne !

L'autre façon de voir les choses c'est que plus une protéine est en grande quantité plus elle va être éluée sur un nombre de fraction importante. Donc cela tu peux le vérifier puisque tu as fait des dosages par bradford. Regarde la concentration de chaque protéine dans chaque tube puis calcule la masse ou la quantité de chaque protéine.  [...] On a fait une gamme étalon de l'absorbance de BSA colorée au réactif de Bradford. mais c'est quoi le BSA quelle est son utilité il est censé représenter une protéine.  [...]

[Biochimie] Gamme étalon BSA

En connaissant le coefficient directeur de ta droite, tu peux alors déduire théoriquement n'importe quelle concentration à partir de n'importe quelle absorbance. Mais en pratique, il vaut mieux avoir une gamme qui couvre l'ensemble des concentrations que tu as dans tes échantillons.  [...] Du moment que l'absorbance est comprise entre 0 et 1 et que les échantillons ne sont pas trop concentrés, la relation linéaire entre l'absorbance et la concentration est conservée.  [...]

[Biochimie] Méthode de Bradford

de mon coté je rencontre des difficultés pour tracer la droite,je sais que ça sera la DO en fonction de la concentration de BSA.mais le problème c'est qu'on a utilisé 5 tubes dont un est le blanc plsu deux autres de 1/10 et 1/100 de serum dilué (notre échantillon à doser est l'immun serum),dans ce cas la comment je tracerai ma droiteest-ce qu'elle passera par le zero ou nonet comment interpréter mes résultats.  [...] et bien c'est simple. Normalement tu dois connaitre la concentration de tes 5 tubes qui contiennent de la BSA (concentration différente à chaque fois, qui double par exemple). A partir de là, tu as du les doser et tu connais donc maintenant leur DO.  [...]