• Santé - Concentration, Expression, Protéine, CIP

[Biologie Cellulaire] p53 : apoptose, sénescence

La protéine p53 est un facteur de transcription instable. malgré une synthèse continue, elle est sans doute trop peu abondante dans une cellule normale pour avoir un effet significatif.  [...] L'élévation de la concentration de p53 a d'abord comme effet d'activer l'expression de la protéine Cip-1, inhibitrice de l'activité kinase des Cdk. les complexes cycline.Cdk sont inhibé. la mitose est bloquée à la transition entre les phases G1 et S, ou G2 et M, laissant à la cellule le temps de réparer l'ADN avant de poursuivre le cycle cellulaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] mise en évidence d'une phosphorylation

Pour la mise en évidence d'une phosphorylation, dans le cas où le résultat va être publié, il vous faudra forcément un marquage métabolique, je ne pense pas qu'une revue accepte qu'il manque une expérience aussi démonstrative... Si vous avez une idée de la kinase phosphorylant votre protéine, vous pouvez définir le(s) site(s) phosphorylés sur la protéine grâce à des logiciels bioinformatiques et à la séquence consensus de phosphorylation de la kinase (si cette séquence a déjà été définie).  [...] Enfin, si vous suspectez un rôle cellulaire liée à cette phosphorylation, vous pouvez muter la sérine ou thréonine en arginine. Cette mutation est phosphomimétique c'est à dire qu'elle mime une phosphorylation permanente du site concerné sur la protéine. Ainsi vous pouvez voir ce que cela provoque sur les rôles suspectés de cette phosphorylation.  [...]

[Biochimie] Transition G1/S

Un agent mitogène induit une stimulation de l'expression de la cycline D. Ainsi il va y avoir dans la cellule de plus en plus de complexes CDK4/6-CyclineD qui induisent l'expression de la cycline E. A un certain moment il y aurait assez de complexes CycE-CDK pour lever le point de restriction R, le problème est que ces complexes sont inhibés par les CDKI cip/kip (p21 et p27).  [...] Le point R est contrôlé par la protéine Rb qui répresse le facteur de transcription E2F qui est un activateur de l'entrée dans le cycle cellulaire. Les CDK-Cyclines phosphorylent Rb qui dans un état hyperphosphorylé se détache d'E2F qui peut alors activer l'entrée dans le cycle cellulaire en stimulant l'expression de gènes impliqués dans les prochains évènements du cycle cellulaire (croissance, réplication de l'ADN, expression des cyclines suivantes,...).  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation Vecteur/insert après traitement CIP

j'ai une petite question de BM à vous poser car je bloque... voilà je fais actuellement du clonage dans mon labo, après digestion de mon insert et de mon vecteur avec une enzyme appropriée je CIP mon vecteur. J'aurai voulu savoir quel est le mécanisme de cette enzyme pour retire le 5'P et qu'il y ait un 3'OH à la place.  [...] Après, pour la ligation, je ne comprends pas comment elle peut avoir lieu entre l'insert et le vecteur si on a plus de 5'P au vecteur. La ligase utilise t'elle de l'ATP présent dans les buffer pour refaire des 5'P pour la ligature.   [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Ensuite qu'elles sont les conditions de tes digestions Car BamHI et NotI ont une star activity qui peut être induite par une digestion trop longue ou alors par une concentration en glycerol trop importante dans ton mix réactionnel.  [...] j'ai fait des recherches sur le kit in-fusion. Je pense que je l'utiliserai bien en dernier recours. Avant tout j'ai pas envie de laisser tomber aussi facilement sans savoir ce qui cloche. Aussi j'ai une autre question qui va d'une observation. A chaque fois (plus de 10fois) que j'ai fait des ligations vecteur d'expression pET45b + inserts d'interet (1330bp, 1894bp et 958bp) après transformation des Top10 puis étalement sur boite j'obtient toujours moins de colonies bactérienne dans la transformation effectuée avec l'insert de 1894bp quand bien même j'ai mis la même quantité de vecteur dans chaque produit de ligation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation

Ca fait deux semaines que je tente de faire une ligation entre pCLNCX et mon insert. J'ai coupé mon plasmide par HindIII et amplifié mon insert avec des amorces contenant le même site de restriction HindIII, la taille de mon insert est bonne. celle de mon plasmide aussi, il a bien été digéré car j'ai comparé le plasmide digéré ou non.   [...] est- ce - que tu as procédé à une déphosphorylation de l'extrémité 5' de ton plasmide digérée l'utilisation d'une phosphatase alcaline est necéssaire dans l'étape qui précède la ligation puisque tu utilises un seul enzyme de restriction... car au moment de ligation il va être plus facile à un plasmide de se recirculariser plutôt qu'intégrer une autre séquence.   [...]

Le burn-out n'est finalement pas reconnu comme maladie par l'OMS

L' OMS avait indiqué lundi que le burn-out, un concept souvent traduit par épuisement professionnel, avait fait son entrée dans sa nouvelle Classification internationale des maladies, qui sert de base pour établir les tendances et les statistiques sanitaires.   [...] La nouvelle classification, appelée CIP-11 et déjà publiée l'an dernier, a été officiellement adoptée par les États membres au cours de la 72 e Assemblée mondiale de l'OMS qui s'est achevée mardi à Genève. Elle entrera en vigueur le premier janvier 2022. Cette liste, dressée par l'OMS, repose sur les conclusions d'experts de la santé dans le monde entier.  [...]

taille d'insert maximum à liguer dans un vecteur

je ne connais pas le plasmide en question, mais d'une maniere generale, presque tout est possible, mais c'est juste un peu plus dur de cloner les grand inserts. si c'est du clonage classique (restriction/ligation) Il y aura un peu moins de reussite que pour un petit fragment, mais 7.   [...] Le principale probleme que j'avais eu avec a peu pres la meme taille d'insert et et de vecteur que toi venait des erreurs pendant l'amplifiaction par PCR, mais je ne sais pas si tu passes par la et de toutes facons, il y a des enzymes efficaces de nos jours.   [...]

[Microbiologie] Recherche antibiotique pour bactérie

- lacIq que le répresseur lacI est exprimé de façon constitutive, ce qui permet d'induire l'expression du fragment du gène lacZ avec de l'IPTG pendant un clonage.  [...] Alors il faut avoir des indications à propos de ce plasmide. un nom ou mieux, une description. Je n'ai pas trouvé sur le site de l'ATCC.   [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

Je voudrais savoir en quelles proportions je dois avoir mon insert et mon plasmide lineaire dans ma reaction de ligation et quelles sont les chances d'avoir le bon produit. En effet, je crains surtout que mon plasmide ne se referme sur lui meme... Y aurait il des techniques.   [...] Vous pouvez utiliser la CIP (Calf Intestine alkaline Phosphatase) pour supprimer les phosphates des extrémités de votre plasmide. Ainsi, durant la ligation il ne pourra pas se refermer sur lui même et seuls pourrons transformer ceux qui n'auront pas été coupés ou ceux qui auront étés recircularisés en intégrant votre insert.  [...]