• Santé - Concentration, Detection, ADN

[Biologie Moléculaire] Techniques de la mise en évidence de l'ADN et l'ARN

Bonjour, si par mise en évidence tu entends révélation on utilise par exemple le BrdU (Bromodesoxy uridine), qui est analogue à la thymidine est qui s'incorpore à l'ADN en cours de réplication, l'ADN devient visible de couleur jaune/orange.  [...] Après en ce qui concerne l'analyse d'ADN ou ARN (détermination de la taille, concentration ou détection de la présence d'un ADN connu) on peut utiliser.  [...]

[Biotechnologie] Pcr

Pour ta question concernant la detection, il n'est pas plus visible lorsqu'il est fixe a l'ADN, il est juste plus concentre.  [...] Réponse me semble-t-il un peu rapide, autant la rectifier même trois ans après. On trouve dans Wikipedia que ce produit est d'une couleur 20 fois plus intense lorsqu'il est lié à l'ADN. La couleur, la fluorescence dépend de beaucoup de facteurs et il suffit de très peu de modifications au niveau moléculaire pour modifier le phénomène.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr

Le BET (ou bromure d'éthidium) va se concentrer au niveau des régions du gel riches en ADN. La détection se fait en plaçant le gel sous une lampe UV qui va révéler la présence du BET par fluorescence. Seules les régions du gel très riches en BET, et donc en ADN, paraitront colorées.  [...] Plus on a d'ADN et plus la coloration est intense. Très souvent, la quantité d'ADN de départ est trop faible pour être détectable par cette méthode et on ne verra donc sur le gel que les amplifiats dont on estime la taille par comparaison avec les fragments de référence du marqueur.  [...]

Rt-pcr

je travaille actuellement dans un labo d'analyse et travaille sur la mise au point d'un protocol de détection des allergenes alimentaires par RT-pcr et j aurais voulu savoir quelles etaient les concentrations optimum rn MgCl2 et en amorces pour l'amplifaction d'ADN de plantes(exp blé, soja...).  [...]

[Génétique] Détection de SNP par TaqMan sur de l’ADN génomique problème?

Je dois déterminer des SNP par PCR TaqMan. Je pars de tissus de tumeur qui on eu un traitement peu adéquat et donc mon ADN est assez dégradé. Le protocole (TaqMan SNP Genotyping Assays de AB) conseil de ne pas utiliser plus de 20ng d'ADN par puits. Mais j ai une post doc audessus de moi qui me force (stagiaire) à utiliser bien plus (de 20 a 100X plus).  [...] La PCR n'a pas fonctionné. Mais elle me dit que je dois utiliser bien plus de matériel car mon ADN est dégradé et envisage une purification par extraction sur gel pour ne conserver que les fragment ADN les plus importants.  [...]

[Biochimie] ELISA : détermination de la sensibilité

Pour les définitions, on parle de limite de détection (LD) pour la plus petite concentration détectable se différenciant du bruit de fond et de limite de quantification (LQ) pour la plus petite concentration dosable avec une incertitude acceptable. Ta définition est un mix des deux.  [...] La limite de détection est la plus petite quantité ou concentration qui peut être distinguée d'un blanc de la réaction. Elle est égale à trois fois l'écart-type de précision, mesuré sur le blanc du réactif.  [...]

[Immunologie] Mise au point d'ELISA Compétitive indirecte

puis nous avons tester les concentration de 600, 700 et 750 ng/ml, ils donnent DO= 3 et les concentration de 800 ng/ml et 1µg/ml de bnzo-hrp donnent successivement DO= 1.2 et DO= 2.1, donc comment expliquer ça est ce que notre HRP est dégradé ou quoi.  [...] Comment corréler la do avec la concentration de benzo non marquée, car on auras pas de coloration (l'intensité de coloration est inversement proportionnelle à la concentration de la substance à quantifier).  [...]

[Biologie Moléculaire] Détection adn proviral par southern blot

j'ai vu dans mon cour de biomol que une des applications du southern blot etait la detection de sequences etrangères dans un génome.  [...] je n'ai pas vraiment d'énoncé c'est un exemple de question que le prof nous a posé quand on parlais de la detection d'ADN etrangé dans les applications du southern donc je suppose qu'il veut que l'on réponde en utilisant cette technique. il y a un autre moyen.  [...]

Utilité de la PCR en médecine ?

Sans amplification on ne pourrait pas détecter l'ADN viral qui est en concentration trop faible (enfin ça change, maintenant je crois qu'on peut le faire).  [...] Ensuite si ton échantillon n'est pas assez concentré en ADN à séquencer tu ne pourras pas le séquencer de manière fiable, d'une part parce que les séquenceurs utilisés en routine pour ce genre de manip ont un certain seuil de détection et qu'une seule molécule ne suffit pas, et d'autre part parce que tu veux que ta molécule soit séquencée plusieurs fois pour avoir une certaine profondeur de séquençage te permettant d'affirmer que la séquence que tu as est bien celle que tu avais dans ton échantillon au départ.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN pour détection de Chlamydia

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN pour détection de Chlamydia.  [...] Quel procédé d'extraction d'ADN utilise-t-on pour détecter par PCR la présence éventuelle d'une bactérie telle que Chlamydia dans un échantillon d'urine.  [...]