• Santé - Concentration, Cellules, Finale

Probleme dilution de cellules pour marquage

Je vous explique. Dans un exercice, on me dit que dans le but de marquer des cellules, on veut mettre une certaine quantité de cellules dans 3 tubes.  [...] Jai la solution qui apparement serait de rajouter 1mL de solution de dilution dans mes cellules de Depart et ensuite prélever 50microLitre et les mettre dans un tube.  [...]

[Biologie Moléculaire] Impossible de récuperer ma protéine GST-X

je produit en Bl21 des protéines GST-X, la production a été mise au point et la protéine est bien exprimée. Lorsque je veux récuperer cette protéine, j'utilise un tampon de lyse contenant du lysosyme, Dnases ( avec MgSo4 et CaCl2) à de très forte concentration, il y a du triton, du chaps et une forte concentration en sels à 1M, tris-Hcl à pH8 mais je n'arrive en aucun cas à sortir ma protéine.  [...] - les cellules sont pas lysees. Pas besoin d'incuber tes cellules ON dans le tampon de lyse. Ca devrait aller plus vite que ca, en plus c'est pas top de garder des proteines si longtemps. Utilises un tampon tout bete Tris + lyzozyme a 37 deg 30' puis rajouter du SDS pour une concentration finale de 1%.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

Le Glycérol c'est pas le top pour les cellules en général. Quand je congèle mes bactéries après miniprep la concentration finale en Glycérol est de 10% et je n'ai jamais eu aucun problème pour les faire repartir même en grattant un peu pour une midiprep de 200ml.  [...] Nous utilisions du glycerol pure et stérile (99%), pour une concentration finale de 25% (jusqu'à 50% pour les bactéries fragile, c'est à dire avec un grand plasmide (entre 15 et 20kpb).  [...]

[Biologie Moléculaire] Calcul de rendement

En réalisant une électrophorèse sur la purification obtenue, on obtient les concentrations finales des fragments (dont le 5'gai de pCRgai, estimé à 5ng/µl, ce qui est peu), en comparant la luminosité des bandes.  [...] Sachant que Rendement = (Concentration après purification) / (concentration avant purification), il me manque donc la concentration avant. On connait la concentration d'ADN (donc celle du plasmide) présente initialement. Cependant, pour connaitre celle des fragments présents (donc l'extrémté 5', après digestion) j'essaye cette formule. (Concentration ADN * (784/5484)). Donc.  [...]

[Physiologie] Effet du potassium sur la contraction du muscle lisse de l'aorte

On sait que la concentration intracellulaire de potassium dans une cellule est d'environ 160mM, et avec ce que j'ai ajouté de KCl, j'obtiens une concentration extracellulaire finale de potassium de 31,25mM + 5,9 mM (provenant de de la solution de Krebs). Au final on a toujours [K+] extracellulaire.  [...] [K+] intracellulaire donc le potassium ne peut pas diffuser selon son gradient chimique et provoquer une dépolarisation de la cellule qui active les canaux calciques voltages dépendants.  [...]

[Biologie Cellulaire] Toxicité d'un inhibiteur de caspase 3

Les données du constructeurs ne parlent pas de toxicité du produit ni d'une posologie en particulier. Ils préconisent seulement une concentration (de 1000X à 5000x).  [...] Tu devrais peut-être essayer de l'utiliser à concentration finale 1000x inférieure à celle de cette solution-mère, voir même tenter une gamme de 1000 en 1000 depuis 1000x à 5000x pour voir laquelle convient le mieux à ton type cellulaire.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

je vois oui... tu as quelle concentration finale en BSA dans le tampon.  [...] oui 1% c'est pas rien. Faut tenir compte de ça. Ma seule idée c'est celle de l'extraction à blanc, comme ça tu récupères autant de BSA que dans les échantillons. Sauf si tu as besoin d'une activité relative ou dans ce cas tu ne prends pas en compte l'activité absolue en fonction de la quantité de protéine totale.   [...]

[Biochimie] facteur de purification et rendement

Lors de la détermination de l'activité de la pyruvate kinase, on a utilisé 100 microlitres de solution à 0,1 mg/mL, prélevés sur les 200 mL de solution obtenue après une étape de purification par chromatographie d'achange d'ions portant sur 1 litre de solution de départ dont l'activité spécifique était de 10 U/mg de protéines et la concentration en protéines de 2 mg/mL.  [...] j'aurais besoin d'une précision la concentration de 0.1mg/ml c'est bien la concentration en enzyme dans la solution finale as tu la concnetration en protéine finale.  [...]

[Biochimie] ِQue veux dire le "X" dans les concentration

Ensuite tu multiplies cette concentration par 10 ou par 100 et tu fais la solution correspondante. Tu obtient ainsi une solution stock a 10X ou 100X.  [...] 2. Je les compte et je prélève ce qu'il faut et complète à 2 mL pour obtenir une concentration de 1,2. 10^6 cellules / mL (4 fois plus que ce que je souhaite).  [...]

[Biologie Cellulaire] Dissociation celluaire

Je suis encore dans une légère impasse.'( et j'ai besoin d'aide. de calcule.   [...] En fait je veux tester un protocole de dissociation cellulaire en utilisant de la collagénase de type III dissoute dans du RPMI avec d'autre antibiotiques...Je dispose de 2.4 mg de collagénase type III contenant 1.5KU et je souhaiterais avoir un milieu RPMI avec une concentration finale de collagénase type III de 100U/ml.  [...]