• Santé - Coloration, Nucléaire, Localisation, Protéine

[Biologie Cellulaire] Immunofluorescence

Quand vous êtes en fluorescence vous ne voyez que votre signal. Si vous voulez montrer que la distribution de votre protéine est bien nucléaire, ou est uniquement cytoplasmique, il faut que vous puissiez localiser votre noyau. En fait ce que vous souhaitez c'est mettre en évidence deux compartiments, un nucléaire et un cytoplasmique.  [...] Sinon vous avez compris. C'est la superposition des images de l'immuno et de la coloration nucléaire qui donne la localisation de la protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Méthodes d'étude de l'ADN

Le but de cette était de vérifier la production de SC35GFP, et surtout vérifier son poids moléculaire ainsi que la quantité relative vis-à-vis de la protéine SC35 native. On a donc put en conclure que la protéine SC35 n'est pas trop sur-exprimé (2-3 fois plus dans les cellules SC35GFP+) et que cette sur-expression est stable dans le temps.  [...] Ajoutons à cela une IF, et on observe que la protéine SC35GFP à une distribution caractéristique des speckles, corps nucléaire où elle se trouve en majorité. On dispose donc d'une protéine fusion probablement fonctionnelle (vu que sa fonction est liée à sa localisation).  [...]

[Biochimie] Protocole fractionnement : isoler le cytoplasme et le noyau

Afin de montrer la localisation préférentielle d'une protéine (noyau / cyto) dans différentes conditions et avec différents mutant de cette protéine, je recherche un protocole permettant de séparer le cytoplasme de la fraction nucléaire. Puis, je visualiserai les niveaux de la protéines en WB.  [...] jai besoin d isoler les proteines cytoplasmiques de celles nucleaires est ce que votre protocole marche avec les cellules en suspension.  [...]

[Biologie Cellulaire] Infos protocole

- les conditions d'IP dépendent de la protéine à immunoprécipiter. sa localisation (membranaire, cytosolique, nucléaire) conditionne le type d'extraction protéique à effectuer, de son abondance va dépendre la quantité de lysat à utiliser.  [...] Des cellules en culture sont très facilement lysable par rapport à des tissus, qui peuvent être fibreux, ou tres riche en graisse (comme le cerveau). concernant la quantité de tissu, de combien de mg disposes tu Pour des morceaux de tissus plus important (quelques 100aines de mg), on procède en général d'abord à une homogénéisation physique pour casser le tissu, et permettre une action homogène du tampon de lyse sur tout le tissu.   [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 16

Il s'agit d'un immunomarquage d'une culture primaire mixte neurones/astrocytes de rat, traites au LPS detectant en rouge la proteine neuronale Hu et en vert la chimiokine MCP-1/CCL2...avec une contre coloration nucleaire au DAPI.  [...] Deuxième question. les boules bleues semblent attachées à cette racine. est-ce un hasard de la photo, ou est ce une localisation déterminée.  [...]

[Biochimie] Proteosynthese

Une précision, les protéines nucléaires sont synthétisées dans le cytosol. Elles possèdent une séquence NLS (Nuclear Localization Signal = Séquence de localisation nucléaire) qui est reconnue par les importines, elle-même interagissant avec le nucléopore qui permettra la translocation de la protéine du cytosol vers le noyau.  [...] Les protéines de la membrane du noyau quant à elles sont synthétisées dans le RE. Les membranes du RE et nucléaire étant les même, dans le sens où il y a une continuité membranaire, je suppose qu'il y a un adressage membranaire vers une localisation nucléaire mais j'en sais pas plus.  [...]

lentivirus et rétrovirus

petite question. la seule grosse différence entre les lentivirus et les retrovirus c'est que les premiers peuvent intégrer leur génome à n'importe quel moment du cycle cellulaire si oui comment font-ils leur ARN code pour des protéine de localisation nucléaire de d'ADN tout juste retrotranscrit.  [...] Etant donné le nombre de documentation qu'il existe à ce sujet je pense que c'est très bon moyen pour toi de trouver ce qui t'intéresse réellement.   [...]

Problème de biologie moléculaire

Ensuite, pour prouver que la localisation contribue au phénotype... Je ferai une modif' rapide au gène, j'y ajouterai un TAG de signal d'exportation nucléaire, ensuite je pourrai vérifier à l'aide de a GFP que la protéine ne se trouve plus dans le noyau et grâce à un test d'intégrité de la membrane au Calcium (classique), je pourrai vite voir s'il y a une différence entre la cellule avec le facteur exporté et non exporté du noyau.  [...] On aura un ladder pour l'ADN non mélangé à l'extrait nucléaire et un ladder avec une absence d'échelons au niveau de l'interaction protéine/ADN. L'énoncé ne précise pas l'utilisation d'anticorps pour provoquer ce super-shift. Mais c'est envisageable, la question est ouverte.  [...]

[Biologie Cellulaire] voies de signalisation et localisation subcellulaire

Je voulais savoir si vous connaissiez des voies de signalisation intracellulaires impliquées dans la localisation subcellulaire de protéines (ex. localisation à un pôle précis de la cellule, au niveau de certains organites (mitochondrie, RE), périnucléaire ou nucléaire en dehors des cas de protéines portant une séquence NLS).  [...] ça serait pour avoir des pistes de manips pour décrypter les déterminants de la localisation en dehors du cytosquelette (au cas où j'aurais une question sur ce sujet lors de mon oral).  [...]

GFP-tagged protein et localisation nucléaire

Lorsque je regarde leur localisation (IF pour HA, fluorescence directe pour GFP), la HA se situe en périphérie du noyau (réticulum) alors que celle avec la GFP se situe en périphérie ET dans le noyau.  [...] Si c'est une protéine de fusion classique il n'y a pas de raison que la GFP se tire d'elle même. Peut être que la différence de taille (HA vs GFP) est à l'origine d'une localisation différente de ta construction.  [...]