• Santé - Colorant, UV, Révélation

problème de visualisation sur gel agarose

J'ai compris merci j'ai néanmoins une autre petite question. pour rendre les bandes fluorescentes, il faut reprendre le gel et le colorer avec un colorant qui s'intercalle entre les paires d'ADN. ça veut dire que dans le gel, les fragments sont callés dans les mailles du gel.  [...] Les fragments sont de tout façon à l'intérieur du gel, le colorant va donc pouvoir s'intercaler dedans et une révélation aux UV sera alors possible.  [...]

[Biologie Moléculaire] Bandes d'électrophorèse disparaissant ...

2// Un halo de fluorescence apparait autour des colorants du tampon de charge. On a eu le problème avec le Orange G contenu ds le tampon de Promega, avec la formation d'un halo bleu ciel assez intense qui masquait les bandes. J'ai donc refait un tampon de charge contenant uniquement du bleu de bromophenol, et là pareil, en moins intense.  [...] Pr l'histoire de halo. en fait, on utilise un tampon de charge qui contient trois colorants. xylene cyanol, bleu de bromophenol et orange G (Promega), les trois migrants environ à 4000, 300 et 50pb environ, respectivement. Quand on révèle sous UV, les taches correspondant aux colorants sur le gel sont sombres et ne genent en général pas la révélation, elles masquent légèrement ms rien de grave.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme PCR ,la technique inverse-shifting PCR ,génotypage de l’inversion 22 hémophilie A

Cette technique comporte 3 etapes ( digestion enzymatique de l adn, ligation et PCR multiplex ), nous avons un profile attendu qu'on doit retrouver chez un patient qui porte l'inversion 22 qui est la présence de 2 bandes avec des tailles bien précises mais malheureusement on n'arrive pas à.   [...] voir ce profile là sur le gel. soit la PCR ne marche pas complétement et ne voit rien lors de la révélation ( sur plaque UV ) soit on retrouve qu'une seule bande.  [...]

Electrophorèse d'une pilule

Pas forcément, il faut juste utiliser des conditions dans lesquelles il va y avoir migration en fonction du rapport q/m et surtout un moyen de révéler la présence des molécules (de les voir) car ce ne sont aps des pigments.   [...] juste pour dire que l'utilisation de l'electrophorèse ne s'applique pas qu'au proteines... mais sinon je suis d'accord qu'ici la couche mince est plus approprié.Pour la revelation les steroide doivent etre visible en UV.  [...]

Ird800

Je suis en stage à l'INRA et je travail avec une amorce couplé à IRD800 je sais qu'elle émet à 800nm. Mais étant entièrement novice en optique, je me demande si aprés une PCR avec cette amorce je peux obtenir une révélation lors de la photo au UV.  [...] Tous mes témoins négatifs montrent une bande, et c'est pas bien.   [...]

extraction plasmide

je viens de faire digérer un plasmide avec une enzyme de restriction BSER1 puis je l ai purifiée et j ai eu deux barres avec la révélation sous uv mais la j aimerai extraire la deuxième bande pour que sa se recolle pas a mon plasmide mais je sais pas quel méthode utiliser.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Le tampon de migration surtout est toxique. L'acrylamide, bah... c'est aussi toxique. Quant aux révélateurs, c'est pire. Même en essayant de faire plutôt avec la fluorescence de l'ADN sous lampe UV, ça reste du domaine de la fiction de séquencer de l'ADN chez soi.  [...] On détermine les micro-satellite de l'ADN à l'aide de technique de digestion (comme tu le dis toi même, en coupant l'ADN aux bons endroits), ou de PCR (amplification des centaines de milliers à des millions de fois d'un petit fragment, le microsatellite), puis on fait migrer l'ADN sur gel, révélation (aux UV généralement), et hop, on a nos différentes barres.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et fluorescence...

En fait, la DAPI sert à observer tout ce qui contient de l'adn. On utilise un colorant qui se fixe sur les cellules. Ensuite, quand tu envoies de la lumiere violette sur le colorant, il te renvoie de la lumière bleu ( exitation et emission).  [...] Le matos pour la PCR implique pas mal de choses... Les tubes, les pipettes, le thermocycler (c'est le nom de la machine ), les appareils à électrophorèse, le BEt et la lampe pour la révélation avec sa petite imprimante pour les photos de gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr

Le bromure d'éthidium a la propriété de s'intercaler entre les paires de bases des acides nucléiques. Lorsque tu faisun gel, tu mets un marqueur de référence qui contient x fragments de différentes tailles connues. Comme tu connais la taille du fragment que tu amplifies, tu veras lors de la révélation sous UV si ton fragment amplifié est au même niveau qu'un des fragments de ton marqueur de référence.  [...] Le BET (ou bromure d'éthidium) va se concentrer au niveau des régions du gel riches en ADN. La détection se fait en plaçant le gel sous une lampe UV qui va révéler la présence du BET par fluorescence. Seules les régions du gel très riches en BET, et donc en ADN, paraitront colorées.  [...]

principe d'électrophorèse

Pour ce qui est de la révélation (les bandes vues aux UV), elles sont obtenues grâce à un composé présent dans le gel ou que tu ajoute par la suite (souvent du BET si je ne me trompe pas).  [...] Le tampon est une solution dont le pH et la teneur en ions sont bien fixés, ça permet d'un gel à l'autre d'avoir des migrations reproductibles. Les sels permettent au courant de passer sans que le gel ne chauffe (ça arrive que des étudiants mettent de l'eau déminéralisée par erreur et là ça chauffe, les gels fondent, etc).   [...]