• Santé - Clonage, Site, Restriction

[bio mol] pUC et LacZ

le plasmide pUC possède une zone portant un nombre important d'initiateur au clonage. Si j'ai compris lorsque qu'il y a qu'un seul site de restriction, l'insertion de l'insert ne se fait pas forcement à l'endroit souhaité c'est à dire au plus près de ce site.  [...] Pour cloner, on ouvre le site de clonage avec une enzyme de restriction qui lui est spécifique. L'insert est également digérée avec la même enzyme.  [...]

Clonage par PCR

J'ai une petite question... j'aimerais savoir a quoi correspond exactement l'expression clonage par PCR. Est-ce quand on ajoute en 5' de l'amorce la sequence specifique d'un site de restriction, ce qui permet ensuite de liger le produit de pcr dans un vecteur contenant le meme site de restriction (en resume) Ou bien est-ce autre chose.  [...] Je pense qu'il s'agit tout simplement d'un clonage à partir d'ADN que tu as amplifié par PCR q'il s'agisse d'une ligation après digestion enzymatique ou autre.  [...]

[Génétique] carte de restriction

j'ai un exercice dans lequel je dois faire la carte de restriction. or je n'arrive pas à comprendre comment faire car j'ai. région du promoteur du gène et la séquence du site de clonage multiple.  [...] Tu prends la séquence de clonage et tu cherches tous les sites dans ta séquence promoteur+ gene. Ensuite tu en déduis la taille de chaque fragment généré par restriction.  [...]

Enzyme de restriction et activité étoile!

Sinon, pour s'assurer que tout les morceaux soit à bout franc, il suffit de rajouter une autre enzyme, comme la nucléase S1, par exemple (il y en a d'autre). Cela permet toujours de réaliser un clonage après purification et sélection du fragment désiré.  [...] Sinon, si l'objectif est de n'obtenir que des fragments à bouts cohésifs, c'est une autre paire de manche (pourquoi ne pas essayer une digestion partielle). Ou un clonage qui permettent d'insérer un site de restriction plus commun.  [...]

[Génétique] Analyse plasmides recombinants/non recombinants

Alors voilà. On a le plasmide pBSK qui fait 3 kb. Le technicien de laboratoire a dans un premier temps clivé ce plasmide grâce à une enzyme de restriction (EcoRI) au niveau d'un site multiple de clonage situé au niveau de l'opérons lactose puis l'a transféré dans une bactérie d'E.  [...] Concernant ta question du puit 6, je serait presque pret à parier que ce que tu vois est ton plasmide B (donc ta matrice) mise en trop grande quantité. Ca ressemble à du plasmide et comme ni ta pcr dans le puit 5 (tu as parlé d'une erreur de manipulation) ni dans le puit 7 (pourquoi) n'ont fonctionné, je serait tenté de dire qu'aucune de tes PCR n'a marché malheureusement.   [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

L'objectif de ce clonage est de récupérer une partie d'un vecteur, pour se faire une amorce foward a été faite pour pouvoir intégrer un nouveau site de restriction, l'amorce reverse elle doit intégrer plusieurs sites, l'insert que l'on doit obtenir doit faire environ 1500-1600bp.  [...] Franchement si ça déconne arrêtez de perdre du temps et faites synthétiser la séquence. Pour 1500pb il y en a pour 500¬, c'est vraiment rien. Et en plus vous pourrez vous amuser à mettre sites de restrictions, mutations, etc, ou vous voulez et à votre convenance.  [...]

PCR et clonage

on veut cloner une séquence dans un plasmide (pGEM3) coupé par 2 enzymes de restriction (enzymes utilisés pour linéariser pGEM3).mais aucun des sites qui entourent la séquence à cloner n'existe dans le site de clonage de PGEM3.  [...] Ensuite je suis pas certain de l'avantage de cette strategie par rapport au clonage franc directe du produit de PCR... piwi tu pourrais expliciter les raisons qui font que tu as choisis une telle strategie plutot qu'un clonage plus simple.  [...]

[Microbiologie] Taille de plasmide

j-ai les enzyme de restriction BamHI,EcoRI et PstI,COMMENT SAVOIR ESQ CES ENZYMES ONT DES SITES DE RESTRICTIONS POUR LE PLASMIDE pGEM-T ET SI C-EST OUI COMBIEN DE SITE SVP DES REPENCES SONT LES BIENVENUE.  [...] C'est facile pGEM-T est un vecteur de sous-clonage commercial. La carte plasmidique est disponible sur internet. A partir de là un enfant de 6 ans trouverai le nombre de site de restriction pour ces 3 enzymes.  [...]

clonage fou!

Un clonage a priori classique me donne du fil à retordre et peut-être avez-vous déjà eu des soucis avec l'enzyme de restriction SalI.  [...] Sachant que j'ai fait ce clonage à l'identique pour un autre insert et que j'ai le même problème, est-ce que c'est statistiquement possible que le même site de restriction saute deux fois.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

La mutagenèse permet d'obtenir un court segment de séquence comprenant la région mutée. Il faut ensuite remettre cette séquence dans le plasmide d'origine, à la place du petit segment non-muté. Le meilleur moyen de le faire c'est par simple clonage grâce à des enzymes de restriction.  [...] La mutagenèse permet d'obtenir un court segment de séquence comprenant la région mutée. Il faut ensuite remettre cette séquence dans le plasmide d'origine, à la place du segment non-muté. Le meilleur moyen de le faire c'est par simple clonage grâce à des enzymes de restriction.  [...]