• Santé - Clonage, Fragment, Intérêt

[Biologie Moléculaire] Vecteurs navette

Vecteur de clonage. est un plasmide ayant une réplication autonome dans la cellule hôte et un site multiple de clonage afin de cloner un fragment d'ADN d'intérêt.  [...] Il me semble, d'après mes souvenirs, qu'il s'agisse de vecteurs possédant plusieurs origines de réplications leur permettant de se répliquer à la fois dans les bactéries et dans les cellules eucaryotes.   [...]

Définition | Plasmide | Futura Santé

Les plasmides utilisés en recherche biomoléculaire peuvent être bien plus complexes, et notamment contenir également des cassettes de clonage, qui sont en fait des séquences courtes reconnues par des enzymes de restriction capables de couper l'ADN au niveau de ces séquences.  [...] Les chercheurs utilisent les plasmides pour y insérer un fragment d'ADN d'intérêt, grâce aux cassettes de clonage. Ils peuvent ainsi cloner des gènes, afin d'exprimer les protéines ou les ARN et les analyser.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr/clonage

Est ce qu'on fait la PCR apres avoir inseré les fragments d'intérets dans les vecteurs,ou est ce qu'on amplifie par PCR les fragments d'intérets qu'on insere ensuite dans le vecteurPour moi la PCR est une technique de clonage,donc si on connait la séquence qu'on veut cloner,une PCR est suffisante,il n'y a pas besoin d'utiliser de vecteurs apres.  [...] La PCR va permettre d'isoler et amplifier un fragment d'intérêt qui va ensuite être intégré dans un vecteur. Lorsqu'on fait un clonage ou un sous-clonage, on souhaite exprimer ce fragment qui dans la plupart des cas correspond à l'ADNc codant une protéine ou une partie de la protéine.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

on intègre un fragment d'adn dans ce plasmide pUC. ensuite on l'introduit dans une bactérie et l'importance des sites de réplication du pUC va permettre un clonage important du fragment d'adn souhaité.  [...] S'il n'y avait qu'un seul site de clonage, tu aurais une grosse contrainte sur ton ADN de départ et donc presque jamais la possibilité de le découper pour en isoler ton fragment d'intérêt (ou alors, tu aurais à l'amplifier avec de amorces portant le site de restrictions, ce qui est plus lent et peut génerer des erreurs).  [...]

Clonage orienté

Je suis bloquée, j'ai un peu de mal avec les enzymes de restrictions et je comprend pas tout à fait ce que l'on me demande. Sachant que l'on veut un clonage orienté, on me demande de choisir les enzymes de restrictions utilisable du côté de la bordure portant la séquence du promoteur T7 sachant que le fragment d'intérêt contient un site SacII.  [...] Si c'est bien le cas, cela signifie que tu ne peux pas utiliser SacII pour le clonage. En effet, le clonage va consister à amplifier ton insert avec des oligos de PCR portant des sites de digestion aux enzyme de restriction voulues. On ne veut donc pas que la digestion en question coupe ton insert en deux.  [...]

[Biochimie] Gateway technologies

Dans le même ordre d'idée, eais làn utilisant de la BP clonase plutôt que de la LR clonase, on peux faire la réaction inverse, mais là encore, je vois pas très bien l'intérêt. C'est juste pour avoir notre fragment d'intérêt sur un vecteur avec une résistance à la Kanamicine plutôt qu'à l'Ampicilline.  [...] Pour commencer tu réalise une première recombibaison avec ton entry vector et ton fragment d'ADN d'intérêt flanqué des attb1/2.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage directionnel

soit un clonage directionnel d'un insert dans un plasmide vecteur, c'est quand l'adn contenant l'insert et l'adn vecteur sont tout les deux digérés par les mêmes enzymes de restriction, et donc le clonage se fait par appariement d'extrémités cohésives, c'est ça.  [...] Le clonage directionnel est un clonage dans lequel le fragment cloné ne peut se cloner que dans un sens (en effet grace a des enzymes de restrictions qui forment des extremités incompatibles). Le clonage non orienté est un clonage dans lequel le fragment peut s'insérer dans les deux sens.  [...]

[Divers] clonage et maths

Le problème avec le clonage d'un fragment d'ADN c'est que le matériel n'est pas classiquement présent dans un lycée (pas de bactérie, pas de plasmide, pas d'enzyme de restriction). Vous pourriez éventuellement tenter de trouver un labo qui veuille bien vous accueillir 3 demies journées pour vous faire faire un clonage (il serait bien sympa ce labo).  [...] Une chose intéressante peut survenir pour vous au moment où l'on fait migrer nos fragments pour diverses vérifications. On les fait migrer dans un gel d'agarose en principe et la migration se fait non pas en fonction de la taille des fragments mais du log de la taille des fragments.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage petit fragment d'ADN

après criblage j'obtiens des clones mais une PCR à l'aide d'amorces spécifiques de mon fragment montre qu'il n'y a pas d'insert dans le plasmide.  [...] Sinon une purification sur gel après la digestion peut permettre de savoir si la digestion a bien eu lieue (mettre le produit non digéré et digéré sur un grand gel d'agarose 2% que tu fait migrer sur la nuit a ~ 60 V ça permet d'avoir une assez bonne résolution pour les fragments de cette taille).  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur de clonage et le vecteur d'expression

[Biologie Moléculaire] vecteur de clonage et le vecteur d'expression.  [...] Vecteur de clonage. Destiné à isoler physiquement un fragment d'ADN et à amplifier le nombre.  [...]