• Santé - Clonage, Construction, Transgene

OGM - Clonage d'un gène / Construction du trangène

Alors voilà je me retrouve devant un problème. Je distingue mal la différence entre clonage d'un gène et construction du transgène.  [...] Par ailleurs pour créer un OGM il va aussi falloir créer un transgène, c'est à dire notre séquence d'intérêt mais aussi y ajouter un promoteur, éventuellement des séquences régulatrices et tout ca. Mais comment se fait cette étape la Et une fois que l'on a formé notre transgène, il faut de nouveau utiliser un vecteur pour remultiplier notre séquence d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Projet de clonage

ce trimestre on fait un projet de clonage du gen-gfp dans pcDNA3.1 et calculer l expression du transgene le gfp gen doit etre apres le CMV promoteur. on doit faire une strategie de clonage ( on est a 7 en groupe) chaqu un doit pense a une strategie et apres on va comparer les resultats.  [...] dans le principe c'est bon, mais ensuite il faut que tu connaisses les cartes de restriction des vecteurs pour voir le sites disponibles et déterminer si tu peux faire un clonage orienté et cohésif de ton gene. Il faut aussi que tu sois plus précis, par exemple pour les bactéries, il faut que tu sois capable de déterminer si les bactéries ont intégré la construction, tu vois de quoi je parle.  [...]

[Biologie Moléculaire] [biologie moléculaire] Le clonage thérapeutique

A ce propos, une question me vient a l'esprit, est ce que quelqu'un sait si c'est une population clonale qui est reintroduite ou juste l'ensemble des cellules ayant integre le transgene (j'ai mon idee sur la reponse mais j'ai la flemme d'aller verifier la reponse 8)).  [...] Il y a effectivement une selection afin de ne recuperer que les cellules ayant integrees le transgene, seulement ensuite il n'y a pas de clonage de la cellule. Autrement dit on re-injecte differents clones possedant le transgene. chacunes de ces cellules posseant donc un transgene integre a un loucs different.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

Autre chose. dans mon cours j'ai écrit qu'on peut aussi détecter le transgène par PCR en utilisant un couple d'amorce spécifique de celui-ci pour amplifier la séquence d'interet par PCR en utilisant de l'ADN codant un gène murin témoin. Je ne comprend pas, si j'ai bien compris le seul fait de détecter la sequence par electrophorese devrait prouver la présence du transgène, mais alors pourquoi a t'on besoin d'un témoin Est-il indispensable.  [...] 4) il peut arriver que tu obtiennes des protéines tronquées c'est ce que t'as écrit (l'organisme n'exprime pas la même quantité de protéine recombinante), c'est probable des mutations spontanées peuvent apparaître lors du clonage.  [...]

[Biologie Moléculaire] ogm

quel est la bonne construction qu'on peut etablir pour avoir un transgene utilisé en alimentation sans qu'il y est un probleme de transfert des genes marqueurs exp. antibiotiques chez l'organisme receveur.  [...] comment peut-on suivre notre transgene dans ce cas en etudiant l'activité synthetique ou bien l'acide aminé en question permettera de selectioner les cellules transformées.  [...]

Expression d'un transgène

Si on veut exprimer un transgène uniquement dans un type cellulaire d'un organisme il faut le mettre sous le contrôle du promoteur d'un gène exprimé uniquement dans ce type cellulaire.  [...] Je veux faire exprimer ce transgène uniquement dans le tissu adipeux, d'où le choix de l'adiponectine. Cependant l'adiponectine est faiblement exprimée de base dans le tissu adipeux donc mon transgène ne sera pas beaucoup exprimé.  [...]

[Génétique] Pour ou contre la transgénèse ?

J'ai a mon tour une petite question. la manipulation des cellules souches (ou clonage thérapeutique) est-il considéré comme de la transgenèse Si tel est le cas ce pourrait être un exemple pour supplémentaire au vu des espoirs soulevés par cette technique.  [...] .Il l'a expliqué.la transgénèse est la modification de l'ADN(l'implantation d'un gène modifié dans l'adn d'un organisme vivant) alors que le clonage est la reproduction de l'ADN d'un organisme vivant.  [...]

[Biochimie] OGM, Amflora pomme de terre

J'imagine que oui, en pariant sur l'insertition d'un transgène dans le gène codant pour la cible, mais ca me semble quand même très aléatoire comme stratégie. Le crible doit être chiant à souhait et on est pas certain que ca sera propre au final.  [...] D'ailleurs je trouve curieux qu'ils aient trouvé judicieux de conserver le transgène dans la patate Amflora. D'un point de vu expérimental, retirer les marqueurs de sélection est plus propre (encore faut il avoir prévu le coup dans la construction au départ).  [...]

[Biologie Moléculaire] traduction terme technique: inverted-repeat transgene

The efficacy of gene silencing in plants using inverted-repeat transgene constructs encoding hairpin RNA has been demonstrated.  [...] Quand tu replieras ta feuille, le rouge ira sur le rouge, le vert sur le vert, c'est une question de logique. Ici vu qu'on parle d'ADN, il faut que ce soit inversé, mais en plus complémentaire.   [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

Au passage, le gène lacZ a beaucoup été utilisé comme gène rapporteur (il l'est surement un peu moins aujourd'hui), en complément de la GFP et avant qu'on utilise la GFP. La réaction béta-galactosidase présente l'avantage d'être très sensible. Si tu dois screener 300 lignées pour trouver celles qui s'expriment dans le cerveau, il vaut mieux utiliser lacZ, en laissant agir la béta-gal pendant 12h tu verras surement de grosses taches bleue apparaître, visible à l'Sil nu, même si ton transgène ne s'exprime que dans quelques cellules.  [...] Une autre approche est la suivante. si tu t'intéresses à une gène particulier, que tu aurais identifié par lecture de la séquence par exemple, tu peux isoler ses séquences régulatrices, même grossièrement, et les placer devant gal4, dans ton transgène. Une fois inséré, l'expression du transgène devrait suivre celle de ton gène d'intérêt, avec souvent des variations d'intensité suivant la localisation du transgène dans le génome (effet de position).  [...]