• Santé - Cible, Séquence, Intérêt

[Biotechnologie] Principe de la PCR

d'exemplaires un fragment d'ADN particulier (la séquence d'intérêt, ADN d'intérêt ou ADN cible) à partir d'un extrait d'ADN (ADN matriciel). En.  [...] effet, si la séquence d'intérêt est présente dans l'extrait d'ADN, il est possible de sélectivement la répliquer (on parle d'amplification) en très grande.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

Car moi ce qui m'intéresserait si c'est possible c'est de savoir au final dans mon échantillon, quel est la quantité en ng de mon gène d'intérêt. Es ce que cela est possible et si oui comment on peut le faire.  [...] Comment faire un bon étalon alors Si c'est par dosage qPCR, c'est le chat qui se mort la queue, si c'est pas dosage spectro, cela signifie que ton standard correspond à ta séquence cible pure (fragments de PCR, vecteur contenant la séquence d'intérêt, etc...).  [...]

[Biochimie] recombineering...

N'est-ce pas possible, à l'inverse, de faire une construction rapporteur+séquence cible de l'ARN non codant, et donc de repérer la transcription de ton ARN d'intérêt par extinction de l'activité du promoteur.  [...] Par contre l'idée d'utiliser une séquence IRES semble plausible, se système existant bien chez les droso (voir Pubmed. drosophila ires). Tu pourra tester ta construction chez la levure ou autre culture cellulaire avant de te lancer, pour voir si ton rapporteur est bien traduit.  [...]

clonage

Le clonage sert à placer une séquence d'intérêt dans un contexte génétique bien contrôlé, le vecteur. Je suppose que l'idée est de voir ce qu'il y a avant un traitement, ou une exposition aux protéines TALEN et après afin de caractériser la mutagénèse.  [...] Oui facilement si les gènes à différencier sont de tailles distinctes. Possible mais plus délicat s'il s'agit de mutations/substitutions, dans ce cas c'est en clonant le produit qu'on verra mieux la séquence.  [...]

[Biologie Moléculaire] complémentation de mutation chez la levure

quelqu'un voudrai bien m'expliquer le pricipe de la technique, j'ai vraiment du mal à m'ensortir. on dit que le principe est d'isoler un mutant de la levure puis de le modifier avec la séquence cible... si il porte déjà une mutation qu'elle est l'interet de le modifier.  [...] On intègre un gène d'intérêt par transformation génétique chez une levure mutée ayant par exemple perdue une de ses fonctions. Puis, on va regarder au niveau du phénotype de la levure si l'introduction du gène a permis la récupération de la fonction c'est à dire la restitution du phénotype ou encore la complémentation de la mutation initiale ayant entraînée la perte de fonction.  [...]

[Microbiologie] Hybridation Southern Blot

Vous parlez d'hybridation avec la sonde C'est le principe clef de cette technique. on crée une sonde taggée (avec un radio-isotope ou un fluorophore) qui cible la séquence d'intérêt. La sonde s'hybride avec la séquence cible, on lave le gel de l'excédent de sondes, puis on redarde où s'est hybrider la sonde relativement sur le gel.  [...] On remet tout ce petit monde en solution, on élimine avec des sondes (micro-array ou autre technique) les séquences qu'on connait et qui correspondent à des protéines ne nous intéressant pas, et s'il reste encore quelque chose, on le séquence.  [...]

Contrôle interne : diagnostic de légionellose

moi je vais travailler sur la mise au point d'une technique de PCR temps reel pour le diagnostic de legionella pneumophila certes je ne sais pas oi utilise comme controle interne.  [...] Puisque d'apres la literature le controle interne correspond a un ADN synthetique de sequence identique a la cible a l'exception d'une partie.. j.  [...]

[Génétique] Transposon et rétrotransposon

Les rétro-transposons se répliquent de manière semblablent aux rétrovirus (en codant pour une transcriptase inverse, une intégrase,...), du coup ils peuvent réintégrer, parfois, un ARNm d'un autre gène, ce qui donne dans le génome une copie pas tout à fait conforme (ADNc, les régions non codantes et introns sont exclues) du gène codant d'origine.   [...] Si j'ai bien compris, ce qui différencie les rétroposon des transposon est l'intermédiaire à ARN qui par le biais d'une transcriptase inverse sera intégré sous forme d'ADN dans la séquence cible.  [...]

miRNA

J ai commandé des miRNA dont la séquence cible correspond donc au brin qui ne sera pas transcrit. Mais sachant que le miRNA est double brin est ce que quand meme un des deux brins pourra se fixer sur ma sequence cible En bref lorsqu on a un miRNA les deux brins peuvent interferer avec un ARN ou seulement un seul est amener à l ARN.  [...] En théorie, le siRNA serait capable d'inhiber une séquence complémentaire. Le problème avec ta construction, c'est que la séquence peptidique de ton produit sera totalement différente de ta protéine (si j'ai bien compris tes explications). Je sais pas trop ce que tu comptes faire avec ta construction mais pour des études fonctionnelles par exemple, ça me parait mort.  [...]

[Biochimie] Synthese des proteines

Les ARN messager de telles protéines portent une séquence cible qui indique qu'elle est destinée à être sécrétée, elle est donc traduite par les ribo du REG et insérée à l'intérieur du REG en même temps.  [...] J'ajouterais, que le passage de golgi à la membrane plasmique n'est pas systématique, et loin de là. Souvent, des séquences d'adressage en C-term (comme KDEL) permettent le réadressage vers le REG, apres la O-glycosylation de golgi.  [...]