• Santé - Charge, ADN, Bandes, Révélation

[Biologie Moléculaire] Révélation des extraits d'ADN

Bref, la suite logique c'est bien sure la révélation sur un gel d'agarose, seulement voilà, aujourd'hui après avoir placé mon gel dans la cuve j'ai obtenu de grosses taches bleues qui ne ressemble aucunement au profil auquel je m'attendais.  [...] Mais vous avez mis du bleu de charge dans vos ADN non Les bandes bleues c'est en vision directe ou après une quelconque révélation que vous n'expliquez pas.  [...]

[Microbiologie] extraction d'ADN

j'ai fait l'extraction d'ADN au phénol chloroforme je me suis rendue compte à la fin de la manipulation que le culot est chargé également en protéines pourrais je me rattraper.  [...] et pr la SDS page c est une electrophorese qui fait denaturer tn adn. c est un long mecanisme mais facile a appliquer, l essetiel c est qur tn adn denaturé va migrer et pour la revelation t utulise le.bleu de comassie, et dans un des puits tu dois aussi mettre des marqueurs de taille finilamnt t recupere tn gel et tu verifie tes bandes. j espere que je ne me trompe pas.  [...]

[Génétique] Western blot

Je suis actuellement étudiante en Master 1 de génétique et je fais mon stage dans un labo de génétique et je fais beaucoup de Western Blot sur des lysats issus de lignées de liposarcomes. A chaque révélation des bandes, je constate que les bandes du contrôle que je met (la tubuline) ne sont pas identiques d'un puit à l'autre ce qui suggère que je n'ai pas déposé la même quantité de protéine dans chaque puit, mais pourtant je fais bien attention de bien déposer la même quantité de 20µl par puit (30µg de prot pour un QSP de 40µl avec du tampon de laemmli et du tampon de charge.  [...] Le dosage protéique a été effectué correctement. Je dois soumettre mes échantillons a différentes conditions (avec et sans inhibiteur) pour voir l'abondance d'expression des mes protéines selon la condition adéquate, donc il est impératif que la tubuline soit intacte pour tout mes puits pour que je puisse quantifier.   [...]

[Biochimie] Problème de révélation des mbnes de nitrocellulose : bandes non spécifiques claires sur fond foncé

[Biochimie] Problème de révélation des mbnes de nitrocellulose. bandes non spécifiques claires sur fond foncé.  [...] La révélation des membranes de nitrocellulose par chimiluminescence (kit ECL) montre toutes les bandes de l'extrait protéiques blanches sur un fond gris foncé (qui se fonce au fur et à mesure du temps de l'exposition dans l'appareil). Autrement dit la révélation a donné une sorte de ponceau blanc.  [...]

[Biochimie] bandes parasites aprés révélation western-blot

j'aimerais savoir si quelqu'un à l'habitude de réaliser des immunoprécipitations avec révélation de la protéine d'intérêt en western blot.  [...] apré révélation du blot à l'opti 4CN (biorad) je retrouve bien ma protéine d'intérêt (IP fonctionne) ainsi que la bande haute et basse de mon Ac spécifique de ma protéine, mais si je laisse le blot révélé plus longtemps, je vois apparaitre d'autres bandes autour de celles de l'Ac (révélation du blot ~2min) ces bandes sont elles dû à un mauvais blocage de la membrane utilisation d'un Ac-HRP polyclonal comme Ac secondaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

On a fait amplifier de l'ADN de certains de nos échantillons et on faisant migrer les produits sur gel, il s'est avéré que y a eu contamination (révélation d'une bande sur gel correspondant au contrôle négatif).  [...] Le bleu de bromophénol est juste un colorant qui migre comme l'ADN pour suivre l'avancement de la migration. C'est une petite molécule qui migre a peu près à la même vitesse qu'un petit fragment d'ADN. Les bandes d'ADN que tu vois sont les amorces non utilisées dans la réaction et se retrouvent a peu pres a la hauteur du bleu.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

deuxième souci, quand j'ai essai de spoter l'ADN dans le puits de gel, il se diffuse directement en dehors de puits dans le liquide de mogration (TBE), après j'ai changé le tampon de charge, et c'était marché avec quelque échantillons.  [...] Le tampon de charge ne permet pas de précipiter l'ADN mais de le faire couler dans les puits. Êtes vous sure que vôtre système de migration ne présente pas un problème au niveau de la tension par exemple ou alors une électrode qui ne marcherait pas (est ce que ça fait des bulles).  [...]

[Biologie Moléculaire] Eléctrophorèse

Le PAGE SDS dénature les protéines en rompant les liaisons hydrogène, donc si on obtient deux bandes à 50000 et 30000 cela signifie que la protéine est multimérique et contient au moins 2 sous-unités de ce poids moléculaire là.  [...] Je m'explique, oilà ma théorie et si elle est fausse, alors tout mon raisonnement est faux. si on prend le cas de l'hémoglobine, constituée de 4 chaînes de globine. 2 alpha et deux bêta, identiques 2 à 2. Si on fait une electrophorèse Page SDS, alors, on devrait obtenir 2 bandes.  [...]

[Immunologie] Westernblot

Nous avons séparé le gel en 2 parties, une coloré au bleu de Croomassie et l'autre pour le transfert. Après transfert (séparé en 5 bandes), nous avons utilisé le NHS-biotine (sans anticorps) sur une des bandes. Les 4 autres bandes ont servi pour une réaction immunoenzymatique.  [...] Comment as-tu fait la révélation pour les différentes bandes (NHS-biotine et réaction immunoenzymatique).  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

plus le voltage est élevé, la séparation des bandes est rapide mais lors de la révélation la séparation des bandes sera moins nette. Pour certains protocoles nous réalisons des migration à faible voltage durant plusieurs heures.  [...] Je profite de ce topic autour du page-sds pour vous demander un éclairage de ma lanterne s'il vous plaît. Nous avons évoqué cette technique de séparation des protéines selon leur masse dans le cadre de mon master 2, mais les protéines étant de composition en acides aminés différente, avec ce que ces derniers peuvent avoir de fonctions acides ou basiques différentes, je n'arrive pas à comprendre comme la charge globale d'une protéine dénaturée au page sds peut être la même entre deux protéines différentes.  [...]