• Santé - Cellules, Vecteur, Beta

[Biotechnologie] beta galactosidase

Quand on utilise le gène de la beta gal comme gène rapporteur in vivo chez l'animal par exemple, quel est le substrat qui donne la couleur bleueEst-il endogène et peut visualiser la coloration in vivo ou faut-il faire une biopsie et mettre les cellules en contact avec le substrat ex vivo pour visualier les cellules transduites... Merci d'avance.  [...] Merci. Alors ce doit être sur des biopsies qu'ils ont fait ça car c'est pour évaluer l'inocuité d'un vecteur de thérapie génique avec le gène rapporteur de la beta Gal, et ils nous montrent de jolis images de cellules colorées en bleues après traitement.  [...]

Thérapie génique de la drépanocytose, la maladie de l'hémoglobine la plus fréquente

Le travail de l'équipe de Philippe Leboulch a consisté à transférer le gène thérapeutique (beta globine) dans les cellules souches hématopoïetiques de souris drépanocytaires et à l'intégrer dans l' ADN cellulaire. Ce transfert a été fait grâce à un vecteur dérivé d'un lentivirus, dont les gènes codant pour les protéines virales ont été éliminés.  [...] Avant d'envisager un premier essai clinique de cette thérapie chez l'homme, les scientifiques devront vérifier que l'efficacité thérapeutique et l'innocuité des lots cliniques sont confirmées sur les cellules humaines. Les chercheurs espèrent également, dans l'avenir, parvenir à augmenter encore le nombre de cellules souches corrigées.  [...]

[biologie moléculaire] Opéron lactose

Donc dans l'ordre, tu clones ton gène recombinant dans ton vecteur, tu transformes une cellule de E. coli avec ton vecteur, tu la fait pousser sur un milieu contenant un antibiotique, du X-gal et de l'IPTG. Si la colonie devient bleue, c'est que le vecteur se trouve dans la cellule, mais que le gène LacZ est intact, donc l'insertion du gène recombinant n'a pas fonctionné.  [...] merci pour les explications,alors lorsqu'on fait le clonnage dans le vecteur bleusxprit(cotennent le gene lacZ)il faut ajouté de l'IPTG (qui est un inducteur non metabolisable de l'opéron lactose)ce dernier induit la formation du beta galoctosidase,  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide génie génétique

Un plasmide artificiel (vecteur) porte un ou plusieurs gènes de résistances pour sélectionner des cellules qui dans lequel ce plasmide est introduit. Le gène lacZ permet soit d'identifier facilement les cellules portant un vecteur avec un insert de celles dont le vecteur est vide (criblage bleu/blanc comme pour le vecteur pUC18).  [...] Le gène LacZ est souvent présent dans le plasmide pour sélectionner les plasmides contenant un insert. Dans ces cas là, le polylinker est présent dans le gène LacZ. L'intégration d'un insert au niveau du polylinker a donc pour effet d'invalider la beta-galactosidase.  [...]

Le VIH, cheval de Troie de la lutte contre le cancer ?

Le résultat a consisté en un vecteur lentiviral pseudotypé dirigé non plus contre les cellules T mais contre la glycoprotéine P, une molécule située à la surface de nombreuses cellules tumorales et qui est associée à une chimiorésistance des cancers.  [...] Afin de tester l'efficacité de leur vecteur, les scientifiques l'ont injecté par intraveineuse à des souris atteintes de mélanome et ont suivi son parcours grâce à un marqueur fluorescent (la luciférase) initialement intégré. Ils ont ainsi pu constater que le virus se dirigeait vers les poumons où des cellules métastasées avaient migré.  [...]

Mammalian Expression Vectors

J'aimerai savoir si quelqu'un pouvait me conseiller un vecteur d'expression pour mammifère dans le but de sur-exprimer un gène de façon stable dans des cellules humaines. Un vecteur non inductible et taggé à l'eGFP ou à la luciférase serait le top. En effet, il en existe un grand nombre sur le marché et je ne sais lequel choisir.  [...] J'ai cloné un cDNA humain d'un gène codant un facteur d'épissage alternatif dans un vecteur et je l'exprime en stable dans des cellules C2C12 (souris). Et bien mon taux d'expression de l'exogène est extrèmement faible par rapport à l'endogène de souris, et ça en ARN et prots.  [...]

Thérapie génique : un espoir contre la bêta-thalassémie

On décongèle et on place ces patients sous perfusion pour réinjecter ces cellules souches modifiées, ajoute-t-il. Le vecteur, appelé LentiGlobin, qui véhicule le gène-médicament, est fabriqué par bluebird bio.  [...] Les cellules possédant le gène médicament ont ensuite été réintroduites dans la moelle osseuse du patient. Environ un an après la transplantation et grâce à l'augmentation constante du taux de &beta.-globine, les transfusions sont devenues inutiles. Malgré une légère anémie résiduelle, la vie du jeune homme, aujourd'hui âgé de 21 ans, s'est réellement améliorée.  [...]

ubiquitine et protéasome

Je t explique la manip. Enfait je suis entrain de créer le vecteur de clonage permettant de surexprimer la protéine permettant de capter une autre pour l'envoyer au protéasome. Est ce que tes inhibiteurs peuvent s utiliser sur des cellules S2+ Est ce que tu penses que si je transfecte ce vecteur dans ces cellules en presence d'inhibiteur et que je marque ma prot soit disant dégradée je pourrais par cette methode confirmer ou pas sa dégradation.  [...] Je t explique la manip. Enfait je suis entrain de créer le vecteur de clonage permettant de surexprimer la protéine permettant de capter une autre pour l'envoyer au protéasome. Est ce que tes inhibiteurs peuvent s utiliser sur des cellules S2+.  [...]

[Génétique] Thérapie génique: synthétiser le gène correcteur

Est-ce que quelqu'un pourrait me fournir un protocole pour obtenir un gène thérapeutique que le vecteur va implanter dans les cellules à guérir svp.  [...] D'accord. Je fais un TPE sur la thérapie génique. Le problème c'est que je ne sais pas exactement comment obtenir la séquence saine qu'un vecteur transportera jusqu'aux cellules malades.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transduction/transfection

Tu peux faire une lignée stable avec la lipofectamine, c'est juste que le taux de cellules transfectée est faible, et le taux de cellules ayant intégré l'ADN encore plus faible... D'où le moins rapide/moins efficace. Car avec un vecteur viral, tu auras beaucoup plus de cellules transduites et si c'est un vecteur intégratif, tes cellules qui auront été transduites vont intégrer efficacement cet ADN, ce qui n'est pas le cas avec la lipofectamine qui ne pemret pas d'intégrer l'ADN.  [...] Les cellules font aussi des recombinaisons heterologues. Pour les selectionner, on utilise generalement de la puromycine (le vecteur possede le gene de resistance). Alors seules les cellules qui auront intégré aleatoirement ce plasmide dans leur chromosome pourront survivre. On obtient donc des lignées stables.  [...]