• Santé - Cellules, Transgene, Protéine

Fin d'un dogme : les femmes produiraient des ovules toute leur vie

D'autre part, l'expérience a été poussée plus loin. Ces OSC ont été génétiquement modifiées pour exprimer une protéine fluorescente verte, appelée GFP ( green fluorescent protein ). Ces cellules ont été injectées dans du tissu ovarien, et le tout a été greffé sous la peau de souris dont le système immunitaire est déficient, de manière à éviter tout rejet.  [...] La GFP est une protéine qui a été extraite d'une méduse ( Aequorea victoria ) bioluminescente. Les scientifiques utilisent souvent ses propriétés dans le vivant en injectant un transgène comportant le gène pour étudier l'action d'une protéine spécifique ou localiser certaines cellules.  [...]

animal transgénique homozygote

Je vois une solution. faire un transgène en deux parties. le gène que tu veux introduire, plus un gène produisant un marqueur fluorescent. (green fluorescent protein GFP).  [...] Pour effectuer la transgénèse tu as besoin de cellules qui se divisent, donc on utilise des cellules ES, on screen plusieurs centaines de clone (par PCR) et l'on injecte l'embryon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Ce vecteur ne sert donc pas à produire n'importe quelle protéine mais à mettre les séquences qui vont permettre de promouvoir la transcription du gène rapporteur luciférase.  [...] PinPoint contient un promoteur tac de transcription suivi de la séquence d'un tag-Xa. Le tag est un petit peptide qui permet de purifier la protéine indépendamment de la protéine d'intérêt, il est suivi de Xa qui est une protéine qui peut être clivée et permet de donc de retirer le tag après purification pour n'avoir plus que la protéine native.  [...]

[Biologie Moléculaire] Disparition inexplicable

EN revanche, les cellules exprimant le transgène recouvrent une résistance comparable à celles des sauvages. Bizarrement, la perte de fluorescence ne s'accompagne pas d'une perte de résistance. Ce qui me fait dire que seul le GFP serait altéré. Mais il est en fusion avec le gène codant ma protéine.  [...] Le problème du western, c'est que les cellules de souris qui n'expriment plus de fluorescence sanguine ne donnent pas une protéine au poids attendu. Il est plus bas et je me retrouve avec plusieurs bandes, comme si je disposais de plusieurs isoformes de la protéine transgénique mais avec un portion GFP de taille variable.  [...]

[Biochimie] Plein de questions de bioch

Les cellules transgèniques ont participé à la formation de tous les tissus y compris les cellules germinales. Du coup on peut avoir des gametes Tg.  [...] Tg x + ==. Tg/0 Vous obtenez une souris portant une copie du transgène dans toutes ces cellules. C'est ce que l'on appelle communément la souris transgénique (même si la chimère est déjà une souris transgénique, mais son statut d'intermédiaire fait qu'on la différencie généralement de la souris transgénique que l'on cherche à produire).  [...]

[Biologie Cellulaire] Compter les passages

En ce qui concerne la perte des protéines, s'il s'agit de transfectants stables, il est possible que l'expression du transgene diminue dans le temps, soit parce que les métabolites secondaires produits par la cellule inhibent le promoteur, soit parce que les cellules inactive le transgène.  [...] Il est possible que malgré la présence du gène de resistance, et la sélection, tu perdes l'expression de ta protéine, si celle ci est +/- toxique pour la cellule. Seront alors selectionné (au sens Darwinien) les cellules exprimant peu ou plus cette protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

Je ne comprends pas aussi comment la localisation de la protéine peut elle débuter dans une cellule et se propager à l'organisme entier, c'est à dire que si on injecte le transgène dans une cellule donnée de l'embryon,comment va t il alors se retrouver dans une partie de ce dernier (serait ce due à la mitose asymétrique).  [...] si je comprends bien, si l'on veut connaitre la localisation de la protéine d'intérêt avec une séquence régulatrice(recombinaison homologue), il faut forcément que le transgène possède une séquence d 'ADN de localisation (ex.NLS qui soit identique à la séquence d'ADN de localisation de la protéine d'intérêt) et le gène rapporteur.  [...]

Mutagenèse dirigée : un Nobel pour des souris mutantes

Le gène de résistance sert à trouver les cellules qui ont bien reçu le transgène. les cellules sans transgène meurent en présence de néomycine (figure 1). Ainsi on pourra les laisser se multiplier et augmenter les chances de survenue de la double recombinaison.  [...] Ceci est rendu possible par de la transgénèse classique (insertion aléatoire d'un fragment d'ADN exogène dans un génome). Le transgène utilisé est alors la séquence codante de la Cre sous le contrôle du promoteur d'une protéine spécifiquement exprimée dans le tissu qui nous intéresse.  [...]

[Biotechnologie] Quelles protéines d'intérêt médicale ne peuvent être synthétisé qu'en cellule eucaryotes

Pour illustrer l'intérêt de la transfection stable d'un transgène dans une cellule de mammifère, j'aurais aimé trouvé un exemple de protéine d'intérêt médicale qui ne peut être synthétisées qu'en cellule eucaryote. J'avais pensé à l'insuline mais j'ai découvert que sa synthèse peut se faire dans des bactéries.  [...] La transfection stable permet de modifier le génome d'une cellule et de lui faire exprimer un gène d'intérêt, pas forcemment pour le produire en masse, mais plutôt pour l'étudier ou étudier son influence. Le seul inconvénient est que faire du stable n'est pas forcément évident et que ça ne fonctionne pas ou très mal pour certaines protéines mais ça reste des cas relativement rares et la plupart des gènes peuvent être transfectés en stable.  [...]

Faire produire de la chaleur à des cellules

J'ai pensé à un transgène AOX sous le contrôle d'un promoteur spécifique de ce type cellulaire (AOX est exprimé chez les plantes et permet la production de chaleur dans la mitochondrie) mais la protéine est active uniquement sous forme de monomère (et pas de dimère) et il se peut qu'il faille plein de régulations vu que c'est pas un gène exprimé normalement chez les mammifères, donc que ça ne marche pas.  [...] Les acides gras libres pourront traverser la membrane plasmique (étant hydrophobes) ainsi que celle mitochondriale pour activer la thermogénine =. production de chaleur dans les cellules cancéreuses.  [...]