• Santé - Cellules, Puits, Concentration

[Biologie Moléculaire] clonage

Bonjour, SVP je voudrais savoir comment on appel le fait de mettre des cellules eucaryote dans une boite de pétrie a une concentration assez faible (100cellules par ml) afin d'obtenir des colonies individualisées et les mettre en culture par la suite dans des puits de sorte a retrouvé une colonie par puits dans une boite de 24 puits par exemple.  [...]

Ramener concentration d'un dosage cytokine à la quantité réel de cellules.

J'ai effectuer un dosage d'une cytokine sur différents puits traités avec différents produits et je me suis aperçu que en fonction des produits utilisés, ma quantité de cellules n'étaient pas la même.  [...] Je m'explique. j'ai ensemencé 4 puits à la même concentration en cellules et je traite mes puits avec différents produits et lorsque je compte la quantité de cellules dans les puits après 24h de traitement, il s'avère que pour un des puits la quantité est très faible comme si il n'y avait pas eu de prolifération cellulaire.  [...]

Lignée Jurkat et adhérence

Après, ces cellules ont était cultivée dans une plaque 24 puits à une concentration de 0.5e6 cellules/mL et lorsque j'ai fait cette observation (24h après), la concentration était de 1.4e6 cellules/mL.  [...] Donc, est ce qu'il se peut que cultivée ces cellules en raison de 1mL par puits ne soit vraiment pas adaptée pour ces cellules.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème test MTT et différenciation

Mon protocole est le suivant. dans une plaque 96 puits incubé 24h pour les cellules HepG2 et 48h pour les cellules SK-N-BE(2) à l'avance (à une concentration de 60 000 cellules/puits), je retire le milieu complet (avec SVF) de mes puits puis je dépose le traitement (molécule diluée dans du milieu incomplet.  [...] Je réalise également une différenciation des cellules SK-N-BE(2). pour cela j'ensemence une plaque 48 puits à 40 000 cellules/puits dans du milieu complet avec 10% de SVF le jeudi, le vendredi je change le milieu complet + 10% SVF et j'ajoute 10 µM d'acide rétinoïque.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

Concernant les Kinases, je penses pas que ce soit moi, car cela est traité dans les autres figures...De plus, ces figures ne permettent pas de dire le rôle des kinases, non J'ai beau regarder, comment savoir si les kinases ici régulent l'ubiquitination de PCNA Avec ces immunoblot, nous savons juste que siRNA régule l'ubiquitination par rapport aux différnetes cellules.  [...] L'actine est, bien entendu, une protéine ubiquitaire dont on estime que les différents traitements appliqués aux cellules ne vont pas modifier la concentration. Ainsi, on s'en sert pour certifier que l'on a bien déposer la même quantité globale de protéine dans les deux puits (contrôle et expérimental).  [...]

Question :

J'ai comme modéle de cellule des CHO-K1, et pour atteindre mon but, j'ai penser faire des tests d'adhèrences sur microplaquettes avec des fibronectines par exemple comme recepteur dans les puits.  [...] 2 manips, en utilisant des cellules CHO-K1 traitées avec des enzymes qui vont cliver les parties extra mb des integrines ( j'ai pensé également à des glycohydrolases mais ce n'est pas assez spécifiques). Et en utilisant des CHO-K1 non traités avec l'enzymes, les microplaquettes peuvent etre traité avec le réactif de bradford on peut déterminer la concentration de proteines par spectro donc aux nombre de cellules dans les puits.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cellules de Malassey

Vous devez donc préparer des tubes de cellules (volume final compris entre 7 et 10 ml) à concentrations souhaitées en faisant des dilutions en cascade à partir de la culture.  [...] Donc en concentration cela te faire 20 fois moins. Donc il te suffit de préparer un tube de 10 ml 20 fois moins concentré. Pour cela tu prends un volume de ta solution mère 20 fois moins important que 10 ml, c'est à dire 0.5 ml et tu complète à 10 ml. Et voila il te suffit de prendre 2 ml pour réaliser le 1er puits à 100 000 cellules par ml.  [...]

Comptage de cellules dans des puits

J'ai un petit problème lié à un comptage de cellules dans des puits. pour faire simple, dans un puits de 3000 cellules, certaines sont colorés en bleu et d'autres non.  [...] En effet, pour moi, il faudrait que pour les quatre régions choisi du puits on compte les cellules coloré en bleu et celles non bleu pour pouvoir faire un proportion sur l'ensemble du puits permettant de trouver le nombre de cellules colorer sur les 3000.  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème culture cellulaire HEK293 en plaque 96 puits

Je travaille actuellement avec des HEK293 que j'ai repiquées en plaque 96 puits dans le but de faire un MTS. 24h après le repiquage (~10000 cellules/puits), mes cellules apparaissent adhérentes, belles et bien éparpillées dans le puits mais peu confluentes (20% grand max).  [...] Le milieu des puits est alors changé et les cellules sont ensuite incubées 24h avec un milieu contenant des antibiotiques (Pen-strep) ainsi qu'une molécule cytotoxique. Le souci c'est que le lendemain, je retrouve dans mes puits contrôles des cellules disposées en auréole et complètement agglomérées en périphérie (rien ou presque au centre).  [...]

[Immunologie] Problème de graphique pour un TP ELISA

On a fait varier la concentration en BSA dans les puits horizontalement.  [...] On a fait varier la concentration en AC1 dans les puits verticalement.  [...]