• Santé - Cellules, Protéines, Anticorps, Couple

[Biotechnologie] cytométrie de flux/épifluorescence

la cytometrie de flux est une technique qui permet de détecter la taille, la granulosité d'une cellule ainsi que la fluorescence de protéines cellulaires (protéines fluorescentes comme la GFP ou marquées avec un anticorps couplé à un fluorochrome) ou de l'ADN (ex intercalant fluorescent de l'ADN).  [...] Un microscope à épifluorescence est un microscope muni de faisseaux laser, qui permet l'observation d'échantillons tels que des cellules possédant des protéines fluorescentes comme la GFP ou marquées avec un anticorps couplé à un fluorochrome.  [...]

[Immunologie] Faire divorcer un couple Ag-Ac

- soit à bousiller les cellules fixées de manière à libérer un fragment protéique couplé aux anticorps primaires et secondaires.  [...] Tu peux aussi regarder les manips où les auteurs effectuent une purification protéique par chromatogrtaphie d'affinité où la phase stationnaire est constituée de billes couplées à un anticorps dirigé contre la protéine d'intérêt. Généralement, ils utilisent la force ionique pour éluer la protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot / proteine hrp

Je ne comprends pas bien. On peut tout à fait faire un western avec SDS et utiliser un anticorps couplé à la péroxydase. Le SDS agit pendant la migration mais une fois que les protéines sont sur la membrane, il n'y a plus de SDS et si il en reste il disparaît avec les lavages donc aucun problème pour la péroxydase (et d'ailleurs intuitivement ça coule de source car les anticorps que vous allez utiliser, avant la péroxydase, nescessitent leur conformation 3D ce qui prouve que le SDS ne bouleverse pas la manipe une fois que l'on est sur la membrane).  [...] Maintenant vous pouvez tout à fait faire un gel non dénaturant sans SDS si vous voulez garder la conformation native des protéines et conserver les complexes, mais cela n'a rien à voir avec l'utilisation ultérieure d'un anticorps couplé à la préoxydase.  [...]

Les nanocristaux appliqués à l'étude du vivant

Les développements récents de la biologie impliquent l'observation des protéines en temps réel dans les cellules vivantes. Le suivi des protéines est rendu possible suite à leur marquage par un composé fluorescent. Le challenge réside dans le développement de composés qui soient non toxiques et suffisamment fluorescents pour permettre des observations dans de bonnes conditions.  [...] Le récepteur est initialement reconnu par un anticorps spécifique couplé à la biotine. Les cellules sont ensuite incubées avec les nanocristaux qui vont se coupler à l'anticorps, lui-même associé au récepteur. Les mouvements sont ensuite analysés en microscopie.  [...]

[Biotechnologie] Cellulase, comment l'extraire rapidement ?

Mais me si tu extrait tes protéines tu auras un mix de toutes tes protéines, et tu ne peux pas faire de purification home-made car il te faudrait soit des colonnes de séparation, soit des anticorps dirigés contre ta protéine et couplé a des billes magnétiques.  [...] Cependant si tu n'as pas besoin de quelque chose de pur, tu peux toujours utiliser l'extrait protéique et simplement le concentrer et tu auras l'activité cellulase dans ton extrait (mais avec d'autres protéines dedans donc d'autres enzymes et d'autres activités aussi, mais si c'est pour digérer des déchets végétaux et obtenir des dérivés glucidique, ca ne devrait pas déranger) par contre tu auras de petites quantités, si tu veux valoriser les déchets végétaux a l'échelle industrielle cela va te poser quelques problèmes.  [...]

[Biologie Cellulaire] La cellule mystère.... - Page 8

Pour la coloration, je dirais anticorps primaire anti-tubuline avec un anticorps secondaire anti-anticorps primaire couplé avec la GFP ( je ne vois que cette coloration faisant un tel vert). Pour l'ADN, bleu de toluidine(je suppose que c'est pas ça, ça serait trop facile.).  [...] La GFP peu probable on l'utilise pour des transfections en protéines de fusion (l'anticorps couplé à la GFP est pas rentable économiquement et techniquement).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de detection de ma protéine par immunofluorescence

voila j'ai transfecté mes cellules (HepaRG) avec un plasmide pcDNA3.1 Directional TOPO (Invitrogen) contenant mon insert d'intérêt (la protéase NS3 du virus de l'hépatite C). Ce plasmide contient aussi une tag V5, qui me permet (normalement ^^) de detecter ma protéine une fois exprimée dans mes cellules (grace à un anticorps anti-V5, Invitrogen).  [...] j'ai fixé mes cellules avec du méthanol pur froid (-20°C) 48 heures apres la transfection 10 min, à 4°C. J'ai lavé avec du PBS, incubé avec mon anticorps anti-V5 (dilué au 1/200ème) 1h à 37°C, relavé avec du PBS et incubé 1h à 37°C avec mon anticorps anti IgG de souris couplé au FITC.  [...]

[Biochimie] Détection au cytométre de Flux

Mon problème se situe au niveau des résultats obtenus. J'utilise un anticorps couplé à du PE et les cellules sont perméabilisée à la saponine car le CMH de classe I que je souhaite détécté à été rendu soluble. Je commence donc par passer mon témoin négatif (cellules perméabilisées non transfectées + Ac-PE), j'obtiens un pic normal.  [...] Enfin, les cellules ont été lavées après incubation avec l'anticorps, 3 lavages successifs au PBS BSA + centrifugation à chaque fois.  [...]

[Biologie Moléculaire] Immunohistochimie/ Immunomarquage

De ce que je me rappelle les deux termes évoquent la même chose. Et le test ELISA en est un bel exemple. On peut mettre en évidence la présence d'une protéines, Ag, etc... d'intérêt à l'aide d'anticorps primaire, secondaire couplé à une enzyme dans le cas de l'ELISA.  [...] Dans le cas d'un western blot, c'est +/- le même principe détection à l'aide de deux anticorps sauf qu'on agit sur une membrane. Après avoir fait migrer ta protéine sur une membrane, tu la détectes à l'aide d'anticorps primaire et secondaire. Cependant cette technique est bien plus fastidieuse.  [...]

Relation entre l'acide abscissique et le stress végétal

1) L'ABA produit reste-t-il intracellulaire ou peut-il sortir de la cellule productrice initiale pour ensuite être reconnu par les récepteurs d'autres cellules voisines Car il me semble avoir lu qu'il y a un récepteur pour l'ABA, un récepteur couplé aux protéines G, donc l'ABA peut aussi agir sur d'autres cellules non.  [...] Après les protéines produites par ABI1 sont impliquées dans la réponse au stress J'imagine que oui mais dans les liens c'est très difficile de comprendre leur rôle.  [...]