• Santé - Cellules, Marquage, Bruit, Contrôle

[Immunologie] isotype et cytometrie

-Afin de mettre en évidence plusieurs Ag différents, je n'ai pas pu choisir des Ac avec les même isotypes. j'ai donc différents Ac isotypés IgG, IgG1, IgG2a (de même espèce). Par contre j'ai pu avoir un marquage au FITC pour tous mes Ac. Dois-je faire un seul contrôle isotypique négatif avec une IgG.  [...] Mais de toute façon j'ai un protocole de culture cellulaire avant la cytometrie, et les marqueurs que je test doivent être expimés sur 100% des cellules, ou 0%.  [...]

[Biotechnologie] bruit de fond et cytométrie

Quand on fait un marquage en cytométrie, on met généralement, un excès d'anticorps. Si tu laves insuffisament, il va rester des anticorps en solution (non fixés aux cellules ou particules) qui vont augmenter le bruit de fond.  [...] Juste pour info, quand tu fais un marquage en cytométrie, il faut toujours faire un contrôle négatif. Ce contrôle mesure le bruit de fond (fixation non spécifique, excès d'Ac, ect). C'est par rapport à ce contrôle que tu peux dire si un marquage est positif ou non.  [...]

[Biologie Cellulaire] Induction d'apoptose 3T3

Si tu cherches pas un controle où les cellules sont spécifiquement apoptotiques et que tu veux juste un signal positif pour tes marqueurs de mort cellulaire (par ex si tu fais un marquage classique annexin V/PI) tu peux aussi congeler/décongeler un aliquot de cellules ca te fera des cellules nécrotiques.  [...] Oui, les 3T3 sont des fibroblastes, et je ne trouve pas grand chose dans la littérature (je ne suis peut-être pas très douée pour la biblio). C'est effectivement pour un marquage annexin V/PI, mais il me semblait que pour le contrôle Annexin V il fallait des cellules spécifiquement apoptotiques.  [...]

Anticorps qui marque les S3T3 irradiés ?

Présentement, je suis en train d'étudier l'effet de quelques produits sur le cycle cellulaire des kératinocytes cultivés sur une couche nourricière de S3T3 irradiés. Je fais un marquage à l'iodure de propidium, mais je constate que j'ai des cellules multi nucléés qui font un bruit.  [...] J'aimerais trouver un anticorps spécifique qui puisse marquer les S3T3 irradiés, mais pas les kératinocytes humains. Est- ce que vous pourrez m'aider S.V.P.  [...]

[Biologie Moléculaire] se servir d'imagej

Je suis actuellement en train de compter des cellules avec le logiciel imageJ et je rencontre un problème sur certaine coupe le marquage est parasité par le bruit de fond, je voudrais donc savoir se que je peux faire.  [...] Par contre, je ne sais pas ce que tu compte faire, si c'est seulement du comptage de cellules sans quantifications de marquage ca ira, par contre si jamais tu décides de quantifier la fluorescence, tu devras appliquer les mêmes paramètres de Contrast à toutes les images que tu analyses.  [...]

[Biologie Cellulaire] /[biochimie] demande de conseils pour la fixation de cellules

Mon problème est que je n'ai pas de marquage spécifique ni en fixation PFA ni en fixation méthanol. J'ai tenté de faire des perméabilisations TritonX100 0,1% ou 2%. ou SDS 0,1% ou 0,5% ( sur chaque mode de fixation)...rien mis à part un bruit de fond faible sur l'ensemble des cellules.  [...] Voilà ça fait beaucoup de questions je suis désolé...mais en plein mois d'août je suis seul au labo et donc n'ai personne à qui poser ces questions.   [...]

Cytométrie en flux

pour les 2 lignées cellulaires, le marquage est très intense pour DR (on voit bien le déplacement vers la droite de l'histogramme grisé par rapport au contrôle.Ce qui veut dire qu'il y a une forte expression des DR à la surface cellulaire.  [...] En ce qui concerne le peptide CLIP, dans les 2 lignées, on a une superposition de l'histogramme noir avec le contrôle, et donc le marquage est nettement moins intense. Dans la lignée M10.DO, on a une faible expression de CLIP à la surface cellulaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] Microscope fond rouge?

Pour moi l'image E et F sont des témoins, elles montrent que les cellules sont présentes et on en conclu que le marquage est bien spécifique. Les images ont été prises à la lumière blanche contrairement aux images A, B, C et D où les cellules ont été excitées à une certaine longueur d'onde.  [...] Ensuite avec une lumière excitatrice on vient révéler le marquage des cellules (images A, B, C et D). Sans ces témoins, on pourrait se dire qu'il y a aucune cellule sur l'image A or c'est faux, ce qui montre bien la spécificité du marquage et des résultats obtenus.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marquage immuno histo enlever le bruit :o((

Voilà, sur des coupes de muscles de souris, on a fait des marquages fluo des fibres (b-dg sur kit MOM). Le soucis c'est que je dois me compter des milliers de fibres à la main car j'ai un bruit de fond horrible qui empèche le logiciel de faire correctement son travail (Morpho expert).  [...] Le bruit que tu as est certainement du à un interférent, ou à un point critique de ton marquage qui n'est pas maitrisé. C'est souvent sur la préparation de coupe et non sur le marquage lui même que les points critiques sont à surveiller particulièrement.  [...]

[Divers] Définition

Dans le cas d'un ELISA, le bruit de fond peut être représenté par exemple par le marquage non spécifique.  [...] Bah on est tous d'accord pour le bruit de fond causé par un marquage aspécifique des anticorps.  [...]