• Santé - Cellules, Mammifères, ARN

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

découverte de l'épissage), a eu la brillante idée d'introduire directement des petits ARN interférents (siRNA) dans les cellules de mammifères en culture pour induire l'extinction (knock-down) de gènes cibles. Cela avait été montré chez d'autres espèces avec des ARN double brin (dsRNA), mais les tentatives étaient vouées à l'échec chez les mammifères.  [...] Afin de savoir si la taille des ARN interférents constitue le facteur de réussite de l'ARN interférence dans les cellules de mammifères, les auteurs procèdent à la co-transfection pGL2/pRL dans les cellules HeLa avec des dsRNA de 50 ou de 500 nucléotides. Comme contrôle d'extinction non spécifique ils prennent un dsRNA ciblant la GFP humanisée.  [...]

[Génétique] ARN interférence, Aidez moi à comprendre S'il vous plaît..

L'idée de Tuschl fut d'introduire directement les siRNA dans les cellules de mammifères. Cette manipulation provoqua l'interférence ARN sans déclencher la réponse interféron non spécifique. [wikipédia].  [...] Ah.. j'ai compri Que les miARN sont deja présent dans l'organisme et eux ne déclanche pas d'interféron.. donc ma question vaudrai uniquement pour l'ARN que l'on inject dans une cellule.  [...]

Le nucléolinus, une structure cellulaire mystérieuse

On sait donc peu de choses sur cette structure, si ce n'est qu'elle est riche en ARN et qu'elle est retrouvée dans divers types cellulaires. chez les ovocytes d' invertébrés, les cellules épithéliales des mammifères et des amphibiens, dans les neurones et quelques lignées cellulaires transformées.  [...] Les chercheurs supposent maintenant que le rôle du nucléolinus dans la division cellulaire serait de recruter des protéines essentielles au niveau du centrosome. Afin de faciliter leurs futures recherches, les chercheurs du MBL pensent se tourner vers un autre système, les cellules de mammifère.  [...]

influence des peptides signaux sur la sécrétion des protéines

2 mg/ml, ça me semble déjà pas mal en cellules de mammifères. Peut-etre que tu as une proteine naturellement difficile à replier (protéine de plus de 40 à 50 kDa, beaucoup de ponts disulfures, peu de structures secondaires,... ) et que quelque soit le peptide signal que tu rajoutes, tu arriveras à une expression assez faible de toute façon.  [...] Mais à 2 mg/ml, tu peux déjà quasiment tout faire ce que tu veux, même si c'est assez fastidieux en cellules de mammifères (2 mg/ml en cellules de mammifères, j'ai déjà donné et c'est vrai que c'est rapidement lourd). A la rigueur, ça peut valoir le coup de tenter en baculovirus, la production sera meilleure, mais il y a un risque d'aggrégation dans le cas d'une glycoprotéine.  [...]

[Biologie moléculaire] Protocole électroporation cellules mammifères

[Biologie moléculaire] Protocole électroporation cellules mammifères.  [...] Je suis à la recherche d'un protocole efficace d'électroporation de cellules de mammifères (plus particulièrement des cellules de type murine C2C12).  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères.  [...] Essayes de faire une miniprep sur tes cellules, comme on le fait pour les bactéries. Le problème est que les tampons risquent de ne pas être adapté pour cette situation et rien donner comme production. Je ne vois que cette solution en tout cas car les extractions d'ADN classique ne séparerons pas le plasmide de l'ADN génomique alors que les kit mini-, midi- et maxiprep le permettent...pour les bactéries.  [...]

[Génétique] Toujours pour ce joyeux TFE

elle consiste en la production des petits ARN interférents à partir du brin d‘ARN exogène. De façon intéressante, ces ARN interférents ne sont pas exprimés de façon endogène chez les mammifères.  [...] ben Commentla production de petit ARN se fait a partir du brin exogene et Comment ça se fait Qu'il n'y pas d'expression pour les ARN interférents..-s.  [...]

[Biologie Cellulaire] Epissage

J'ai une question assez générale. l'épissage des ARN messagers et d'autres ARN longs non codants (dits messenger like car transcrits par l'ARN Pol II, cappés, polyadénylés) chez les mammifères est-il systématique OU existe-t-il des ARNs qui n'ont pas de séuqnces d'épissage et ne sont pas épissés.  [...] Il y a une équipe dans le labo ou je suis qui travaille sur l'épissage. D'après eux, une grande majorité des ARNm sont susceptibles d'etre épissés même si il est difficile de prédire le nombre d'isoformes protéique réellement produites par un gène, car il est très compliqué de prédire les séquences régulatrices de l'épissage (qui s'ajoutent aux sites donneurs et accepteurs).   [...]

[Biologie Moléculaire] Expression hétérologue de protéine : vecteur baculoviral

* j'ai vu que l'expression chez la levure n'est pas super avantageuse à cause de problèmes de repliements, donc j'ai décidé d'opter pour les baculovirus et les cellules de droso. Mais je ne sais pas ce qui est mieux. ça ou carrément des cellules de Mammifères (je suis dans un labo de microbio ).  [...] Oui ce sont des cellules de mammifères transformées avec un retrovirus. Le retrovirus étant lui même produit à partir de cellules un peu spéciales (je n'entre pas dans le détail) elles mêmes transformées avec un vecteur retroviral modifié.  [...]

Ce qu'on nous apprend au sujet des neurones

Effectivement la découverte de régénération neuronales et de cellules souches neurales chez les mammifères est une grande découverte et une révolution en soi. Ca ouvre de grandes perspectives thérapeutiques.  [...] De même, on a trouvé des cellules souches dans la rétine des mammifères. Elles ne se divisent pas in vivo, mais une approche thérapeutique visant à contrôler leur renouvellement serait également un grand pas.  [...]