• Santé - Cellules, Globules rouges, Tri

[Biologie Cellulaire] Transfection de cellules souches hématopoïétiques

Je cherche des renseignements sur la transfection de cellules souches hématopoïétiques murines. A mon avis il faut utiliser un lentivirus pour ce type de cellules. Je cherche à y faire surexprimer très fortement les gènes MDR1a et MDRb de façon transitoire ou stable.  [...] Vaut il mieux transfecter les cellules de moelle totale après lyse des globules rouges ou bien transfecter après le tri.  [...]

[Biochimie] cytometrie de flux

Ensuite, la taille de la buse influence directement sur la vitesse de tri. Plus la buse est grande (90,100 microns) moins la vitesse de tri est rapide. En gros avec une buse de 100 microns vous trierez environ 10-20 millions de cellules par heure et avec une buse de 70 microns vous pourrez passer de l`ordre de 60-80 millions de cellules par heure.  [...] La pureté ne devrait pas poser de problèmes sur une machine correctement utilisée (respect des tailles de buses en fonction des cellules et de la vitesse de tri en fonction de la buse).  [...]

[Biologie Cellulaire] Cycle cellulaire

a). En traitant les données, tu as accés au % des cellules dans les phases du cycle cellulaire. Tu peux alors conclure sur l'activité de ta molécule (antimitotique avec blocage en G2/M) puis orienter la suite de ton étude en foction de ça (microtubules ou cycline etc).  [...] La maturation des ovocytes peut être observées sous une loupe binoculaire de par l'apparition d'une tâche de dépigmentation témoin de la remontée de la vésicule germinative au pôle animal après traitement à la progestérone. Tu peux aussi utiliser des cellules synchrones que tu peux traiter ou non à l'aide de certaines drogues comme l'a indiqué belouga7.  [...]

leucémie et informatique

le second problème est que vous considérez uniquement les globules blancs, mais dans le sang vous trouvez en immense majorité des globules rouges. Avec votre système de microscope vous allez mesurer dans 99% du temps des rouges et le temps pour passer 1 ml de sang va prendre un temps énorme.  [...] Il faudrait alors probablement, comme en cytométrie, un système de seuil pour rendre aveugle le microscope au globules rouges. Pas facile et risque d'oublier des cellules.  [...]

[Biologie Cellulaire] Cytométrie de flux

J'ai l'intention de couper des copeaux de mon fragment au cryostat pour m'assurer de la part de cellules tumorales dedans, je garde le reste pour le tri.  [...] d'ailleurs pour le tri, il faut dissocier les cellules et il faut qu'lles soient intactes. On peut faire du tri à partir d'un tissu qui a été congelé.  [...]

Un nouveau « micro-organe » découvert dans le système immunitaire

Chez des patients, des coupes de ganglions lymphatiques suggèrent que les SPF ont le même rôle chez l'Homme que chez l'animal. En utilisant une microscopie sophistiquée in vivo, les chercheurs ont observé que différentes sortes de cellules immunitaires se regroupaient dans les SPF.  [...] Il faut pouvoir observer les cellules en trois dimensions et en mouvement dans un animal vivant pour voir ces nouvelles structures. Pour le professeur Tri Than, un des auteurs de ces travaux, il y a encore des mystères cachés dans le corps - même si nous, scientifiques, examinons les tissus du corps au microscope depuis plus de 300 ans.  [...]

Visualisation d'une cellule apoptotique....

En plus on s'attache à ne pas modifier le génome de nos cellules. Le but ultime est de faire ces manips sur des MCF7 qui ne possèdent pas la caspase 3 et qui ne peuvent pas entrer en apoptose après exposition à la staurosporine. On pourrait très bien transfecter la caspase mais comme on ne veut pas toucher au génome on va utiliser un inducteur apoptotique (acide rétinoïque) qui permet d'induire l'apoptose même avec l'abscence de la caspase 3.  [...] Tu peux effectivement suivre les cellules apoptotiques sans les trier avec l'annexine 5 et l'IP. Il suffit de regarder les cellules annexine5 positives IP negatives.  [...]

[Biologie Cellulaire] séparation au ficoll

Après... moi je ne compte jamais mes cellules totales avant la séparation, déjà parce que ça ne me sert à rien et surtout parce c'est pollué par les rouges.  [...] je ne cultive pas longtemps mes cellules in vitro le but est de les transduire (pdt 5jours) via un retrovirus présent ds un surnageant virale qui contient un géne d'intéret. puis par la suite injecter ses cellules transduite à des souris qui in vivo en se diférenciant produiront la proteine de mon géne d'intéret, donc finallement je ne cherche pas a ce qu'elles gardent leur propriétés cellules souches.  [...]

Ciblage de cellules de mamifères

Je ne parle pas d'insérer un vecteur dans des cellules en culture. je parle de distribuer une protéine particulière à certaines cellules.  [...] Sinon oui, avec des techniques genre nanoparticules greffées, oligonucléotides greffés,... tu sais cibler des cellules mais il faut trouver un marqueur unique à tes cellules cibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quantité d'ARN pour PCRq

Dans mon labo je fais de la RT-PCRq à partir de cellules souches hématopoïétiques de souris après un tri par cytométrie. Le plus petit que j'ai fait pour le moment. extraction d'ARN et RT sur 400 cellules puis séparation en 4 puits de PCRq soit l'ARN de 100 cellules environ par puit et ca marche au poil.  [...] Ca le fait très très très largement, pas d'inquiètude, l'ARN que j'extrais n'est même pas dosable au nanodrop vu la mince quantité mais en faisant une RT avec des random hexameres pour améliorer le rendement, les ADNc fonctionnent très bien en PCRq.   [...]