• Santé - Cellules, Extraction, ADN

[Biologie Moléculaire] Extraction de l'ADN de cellules eucaryotes, lyse

dans l'exemple de cellules issues de l'épithélium de la bouche par exemple, quel traitement feriez-vous subir à votre échantillon pour extraire l'ADN.  [...] tu peux egalement effectuer un choc osmotique(qui consiste a mettre tes cellule dans un milieu hypotonique) ainsi un flux d'eau entre dans tes cellules,gonfle et eclate par choc osmotique.  [...]

[Biotechnologie] Souches d'expression et préparation de plasmides

2* L'extraction d'ADN plasmidique consiste à effectuer la lyse des cellules au moyen d'un détergent (dodécyl sulfate de sodium) en présence de soude, à pH 13. A ce pH très alcalin, l'ADN est dénaturé, c'est-à-dire que les deux brins de la double-hélice sont séparés.  [...] L'ADN plasmidique, court (~10³ pb), parvient à se reformer et reste en solution. On sépare alors les espèces par centrifugation. Les protéines précipitées, sont également éliminées avec le détergent et l'ADN chromosomique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Questions relatives à la PCR

Je recueillais ensuite ces cellules pour amplifier les séquences Alu présentent et pour déterminer ensuite, par électrophorèse, la proportion d'individus présentant ou non la séquence Alu dans leur génome.  [...] Simplement pour vous expliquer le protocole. je devais d'Abord isoler l'ADN de quelques potes (et moins potes héhé) à partir de cellules buccales. J'utilisais ensuite du chelex pour absorber les produits de lyse cellulaire pouvant inerférer avec le processus d'amplification du PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification par PCR

Oui et non. Trop peut aussi favoriser la fixation des amorces sur des zones non spécifiques, pouvant expliquer cette bande de 100pb. Les amorces sont de toute façon toujours en excès (La réaction perd de son efficacité au fil des cycles, autant que ce ne soit pas pour un truc aussi bête que ça) mais il convient de tester différentes concentrations pour être sur de ne pas avoir ce type de problèmes.   [...] Tu peux aussi purifier la bande à partir du gel, il existe des kits le permettant. faut découper le gel à partir de la photo prise pour situer sa bande puis on élue l'ADN avec des colonnes comme pour une extraction d'ADN à partir de cellules.  [...]

extraction phénol chloroforme

L'extraction phenol/chloroforme (ou old school ) ne permet pas à elle seule de faire une extraction d'ADN. Il faut faire une lyse des cellules (lyse alcaline ou pk ou...) et d'autres étapes d'extraction/purification/précipitation/lavages peuvent être ajoutées.  [...] L'extraction phénol ne permet que de laver ton ADN préparé en le débarassant des protéines (jusqu'à un certain point)... reste plus qu'a faire une extraction chloroforme pour enlever le phenol qui est dissout dans la phase acqueuse.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR après tri cellulaire au FACS

je souhaite réaliser un génotypage cellules spécifiques. Je vais donc marquer et trier des cellules au FACS, puis je réaliserai une PCR sur les cellules récupérées. Je voulais savoir dans quel tampon il était préférable de reprendre mes cellules pour réaliser la PCR à la suite.  [...] Le même tampon que celui du tri, puis tu centrifuge tes cellules et tu fais un culot sec si tu veux les stocker à -80 ou alors tu fais directement la lyse puis l'extraction d'ADN.  [...]

Extraction simple des protéïnes végétales

Vous savez, le truc tout simple pour extraire l'ADN J'ai lu que ça brise les cellules y compris les cellules végétales. Si ça peut extraire l'ADN, pourquoi ça ne marcherait pas avec les protéïnes (a moins que l'un des produits nécéssaires à l'extraction n'altère celles-ci) Je voudrais aussi savoir si ça peut marcher avec du zeste d'orange ou du bois et si pour faire cette expérience il est impératif de mettre à tout prix les quantités de produits demandés. Merci de me donner votre avis.  [...] je ne comprends pas ta question. Ca fait longtemps qu'on sait extraire les protéines des végétaux ou autres formes de vie. C'est déjà dans les livres de chimie du XIXème siècle.   [...]

rDNA ou rRNA?

Et quand on fait la classique extraction d'ADN à partir de cellules vgales broyées, dans l'ethanol, l'amas floconeux plusoumoins chevelu c'est un mélange n'est-ce pas.  [...] Pour la classique extraction, l'amas floconneux est bien un melange des ADN totaux. D'ailleurs c'est marrant les extractions fait maison, avec que des produits que l'on trouve chez Mr tout le monde. Pour la fete de la science il y avait pas mal d'endroit ou ils faisaient ca.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction de l'ADN tumoral

est ce que quelqu'un peut m'aider comment faire l'extraction de l'ADN à partir des lymphocytes tumorales (càd à partir des patients leucémiques).  [...] Peut-être procéder d'abord à une immuno-lyse via des Ac de lapin ou autre anti-lymphocytes humains, puis récupération des cellules par microfiltration et enfin extraction de l'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

la Banque peut également etre transfecté puis la sélection se fait sur la base des critères des cellueles transformées Expression d'un oncogène rendant les cellules immortelles ou poussanrt sur des milieux sélectifs et autres.  [...] Ensuite, une fois que tu as tout ça, tu transformes pour voir des phénotypes associés à des mutations, des sauvetages de phénotypes ou ce que tu cherches De toute façon, tu conserveras ton ADN en tube après son extraction, pas dans des cellules.  [...]