• Santé - Cellules, Dosage, Protéines

[Biochimie] Extraction et dosage des protéines

Ensuit je transfert le tout dans du Ripa et j'extrait les protéines. Je me retrouve encore avec plus ou moins de cellules sanguines dans ma solutions dues à la lyse. Je n'ose pas l'éliminer car se trouvent également mes protéines d'intêret. Ceci affecte mon dosage (méthode de Bradford).  [...] En fait, lors de la lyse de mon tissu avec le Ripa, j'extrait en même temps que mes protéines tissulaires, des cellules sanguines qui n'avaient pas été éliminées lors de mon lavage de tissu lors du prélèvement. Je crois que je n'ai plus qu'à diluer au maximum même si je suis dans la limite du dosage. merci en tout cas.  [...]

[Biologie Cellulaire] Courbe de croissance de cellules

Je sais que je vais cultiver mes chondrocytes avec du milieu complémenté ou non (groupe contrôle) et que je vais tous les x jours récupérer les cellules et procéder à un comptage au bleu trypan et par la suite faire un dosage de protéines totale avec le kit BCA protein assay de chez Pierce.  [...] Ce que je ne sais pas c'est quel est l'inoculum idéal de cellules A quelle densité cellulaire dois je ensemencer mes boites De quoi dépend ce paramètre Du flacon de culture utilisé, des cellules,... Si je veux pouvoir suivre mes cellules sur 10 jours par exemple en prélevant des cellules pour le comptage tous les 2j (afin d'établir ma courbe de croissance en plusieurs points).  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème dosage microBCA

Je souhaite réaliser un dosage de protéines sur lysat cellulaire avec la méthode microBCA. Les cellules sont lysées avec du tampon RIPA (Tris 50mM, NaCl 150mM, SDS 0.1%, Sodium deoxycholate 0.5%, Triton X100 1%). J'ai d'abord fait un test en réalisant des gammes étalons de BSA diluée dans différentes solutions (RIPA, RIPA dilué au 1/3 dans de l'eau distillée, eau distillée).  [...] En fait le problème que j'ai ce n'est pas que le tampon seul interagit de façon excessive avec le réactif (le blanc n'est pas limpide mais ça reste très acceptable), c'est simplement qu'en présence de protéines même à de fortes concentrations par rapport à ce que préconise la notice du kit, je n'obtient pas la coloration escomptée quand j'ajoute le réactif si la gamme a été faite dans du RIPA.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

Nous avons réalisé avec le sérum d'albumine bovine SBA comme protéine standard, une courbe étalon à six points de concentrations croissantes ( 0. 0,25. 0,5. 1. 1,4. 2 mg SBA/ml).  [...] Dans les deux cas quand tu testeras ton tube contenant ta protéine et le colorant, tu va obtenir une DO que tu repporte sur le graphe que tu a tracer manuellement ou c'est le spectro qui le fait automatiquement.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dosage protéines dans du glycérol ?

Pas trop d'idées désolé (en fait, j'ai regardé dans le Kit de dosage BCA de chez Pierce, et la limite est fixée à 10% pour le glycérol...).  [...] Le BCA avec dilution pour avoir moins de 10% (5µL de solution protéique + 45µL ddH2O) de glycérol a marché. Malheureusement, y a pas beaucoup d'anticorps dans ce tube.  [...]

[Biochimie] Dosage proteine totale sur FHN

J'evalue l'activité de certaine molécules sur deux type de cellules, les FHN et les HaCAT. Pour evaluer cette activité je fais un dosage BCA sur les culots cellulaire pour determiner le taux de proteine totale.  [...] Sur les Hacat la coloration se réalise au maximum en 20mn alors que sur les FHN la coloration se fait en minimum en 2h30mn. Tout d'abord j'aurais voulu savoir si pour certain d'entre vous le constat etait le même. Ensuite j'aurai voulu savoir si ajouter une faible dose de soude pour eclater les membranes et donc acceler la coloration etait une bonne solution.   [...]

[Biochimie] dosage des proteines

faire un dosage de proteine par la methode lowry ou autre methode de dosage.  [...] Pensez-vous que cela pose problème de resuspendre le culot de protéines dans de l'acide (sulfosalicilique 1.3%) avant d'effectuer le dosage.  [...]

[Biochimie] électrophorèse

le mieux serait que vous nous donniez le protocole que vous avez utilisé en précisant effectivement quelle quantité de protéines vous avez déposée.  [...] Question bête mais bon. concernant votre échantillon. êtes-vous sûr qu'il y avait des protéines Avez-vous fait un dosage Peut être que l'élution sur la colonne chromatographique n'a rien donnée.  [...]

[Biochimie] NanoDrop

Tu peux faire les dosages proteiques par colorimetrie. Il est preset pour diverses methodes (bradford, BCA, lowry etc). Il t'autorise evidemment a faire une gamme pour ta quantif si celle presente ne te plait pas.  [...] donc à priori pas de problème pour doser des protéines à 480nm. Il faut juste paramétrer le soft vu que ça ne doit pas être dans les programmes de dosage classique.  [...]

[Biochimie] Dosage spectrophotométrique des protéines

Vous avez aussi le dosage par Warburg et Christian. Il permet la séparation des acides nucléiques et protéines selon un ratio propre à la méthode.  [...] Ton nanodrop a-t-il une longueur d'onde réglable Car dosant les protéines recombinantes, ARN et ADN, je pensais que cet appareil ne fonctionnait qu'à 260 et 280 nm. Le dosage de Bradford se faisant plutôt à 600 nm, si ton nanodrop ne peux pas se régler à cette longueur d'onde, ces résultats ne m'étonnent pas.  [...]