• Santé - Cellules, Couple, Anticorps

Les nanocristaux appliqués à l'étude du vivant

La technique classique consiste à fusionner la GFP avec une protéine d'intérêt et surexprimer cette protéine fusion dans les cellules. En illuminant les cellules avec une source de lumière de longueur d'onde définie, la protéine devient fluorescente et peut être suivie dans la cellule en temps réel.  [...] Le récepteur est initialement reconnu par un anticorps spécifique couplé à la biotine. Les cellules sont ensuite incubées avec les nanocristaux qui vont se coupler à l'anticorps, lui-même associé au récepteur. Les mouvements sont ensuite analysés en microscopie.  [...]

[Immunologie] Faire divorcer un couple Ag-Ac

- soit à bousiller les cellules fixées de manière à libérer un fragment protéique couplé aux anticorps primaires et secondaires.  [...] Pour le tester, tu prend le fluorophore seul (enfin le couple avec anticorps bien sûr) et tu lui fais subir ces conditions, avec un témoin négatif ne subissant rien du tout. En faisant le comparatif, tu t'apercevras vite si tes conditions de récupération de l'anticorps couplé au fluorophore sont bonnes ou pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de detection de ma protéine par immunofluorescence

voila j'ai transfecté mes cellules (HepaRG) avec un plasmide pcDNA3.1 Directional TOPO (Invitrogen) contenant mon insert d'intérêt (la protéase NS3 du virus de l'hépatite C). Ce plasmide contient aussi une tag V5, qui me permet (normalement ^^) de detecter ma protéine une fois exprimée dans mes cellules (grace à un anticorps anti-V5, Invitrogen).  [...] j'ai fixé mes cellules avec du méthanol pur froid (-20°C) 48 heures apres la transfection 10 min, à 4°C. J'ai lavé avec du PBS, incubé avec mon anticorps anti-V5 (dilué au 1/200ème) 1h à 37°C, relavé avec du PBS et incubé 1h à 37°C avec mon anticorps anti IgG de souris couplé au FITC.  [...]

[Biochimie] Détection au cytométre de Flux

Mon problème se situe au niveau des résultats obtenus. J'utilise un anticorps couplé à du PE et les cellules sont perméabilisée à la saponine car le CMH de classe I que je souhaite détécté à été rendu soluble. Je commence donc par passer mon témoin négatif (cellules perméabilisées non transfectées + Ac-PE), j'obtiens un pic normal.  [...] Enfin, les cellules ont été lavées après incubation avec l'anticorps, 3 lavages successifs au PBS BSA + centrifugation à chaque fois.  [...]

Marquage anticorps secondaire

j'ai pas compris cet extrait... On parle de réaction directe quand le marqueur est directement couplé à l'anticorps primaire, et de réaction indirecte quand on utilise un anticorps secondaire (fabriqué chez l'espèce B) couplé au marqueur dirigé contre l'anticorps primaire (fabriqué chez l'espèce A).  [...] notre objectif est d'avoir le complexe anticorps-antigéne mais dans la derniere phrase il s'est concentré sur le couple marqueur et anticorps.  [...]

[Biologie Cellulaire] Marquage de l'activité peroxydase

Pourquoi ne pas essayer de perméabilisé la cellule pour vos anticorps (couplé à un fluorochrome) qui se fixeraient sur les péroxydases Je ne sais pas si expérimentalement c'est faisable.  [...] 2. Que je plante la fixation / l'emission d'un signal correct pour tous mes autres anticorps (j'utilise un mix de 4 ou 5 anticorps, tous membranaires).  [...]

[Immunologie] [Cyto"gramme"] abs & ordonnée?

Ainsi en fonction du marqueur que tu doses (grace à l'anticorp couplé au fluorochrome) tu peux discriminer des populations de cellules.  [...] Si je comprends bien c'est que la BrdU s'insère dans la double hélice en phase S, par l'intermédiaire d'une sonde, qui est une portion d'ADN... Et cette portion d'ADN-sonde qu'on a greffé en quelque sorte sur les ADNs natifs, on peut y adjoindre un des fluorochromes (via anticorps sur brome), avec par exemple en l'occurrence du FITC... (coloration verte.).  [...]

[Immunologie] Protocole ELISA

De la même façon, l'anticorps secondaire est une immunoglobine anti-lapin obtenue en injectant des antigènes de lapin dans une chèvre (anticorps disponibles dans le commerce). Cet anticorps secondaire est couplé à une enzyme peroxydas e obtenue chez le radis ou le raifort. test elisa.png.  [...] NB. je ne suis pas expert dans le domaine mais pourquoi avoir choisi trois anticorps Ne pouvait-on pas couplé la peroxydase à l'anticorps anti-loup directement.  [...]

[Biologie Cellulaire] Différence entre l'utilisation d'un fluorophore et d'une molécule fluorescente

...) alors que les non protéiques servent a faire des marquages a postériori, c'est à dire qu'on doit les fixer a la cible d'intérêt par un moyen ou un autre (affinité (ex phalloidine texas red), couplé a un anticorps (par exemple anti actine fluoresceine), marqueur de compartiment cellulaire (exemple mitotracker).  [...] A partir de ça, on fait un peu ce qu'on veut, que ça soit la GFP ou un marqueur non protéique, on peut les visualiser en microscopie photonique, trier des cellules, faire de la video, etc.  [...]

[Biologie Cellulaire] immunofluorescence ???

Cet anticorps est lui même reconnu par un anticorps secondaire qui lui est souvent couplé à un fluorophore (c'est simple tu commandes simplement cet anticorps couplé et tu l'utilises).  [...] L'exemple le plus courant est le marquage à la fluoresceine ( http.//fr.wikipedia.org/wiki/Fluoresc%C3%A9ine ). On fait réagir l'anticorps avec de de la FITC (fluoresceine isocyanate http.//fr.wikipedia.org/wiki/FITC ). La FITC reagit avec les lysines en formant une liaison thiouree covalente.  [...]