• Santé - Cellule, Protéine, Précipitation

[Biochimie] Interaction cellule-protéine après précipitation (Western Blot)

En temps normal, je fais une lyse cellulaire suivis d'une précipitation du lysat(surnageant après centrifugation) par TCA.  [...] Je me demande donc si éventuellement le fait d'avoir précipité le matériel cellulaire ainsi que les protéines provoque certaine interaction ou quelque chose du genre.  [...]

[Biochimie] Immunoprécipitation pour éliminer une protéine ?

je souhaiterais réaliser une immuno-précipitation non pas pour isoler une protéine d'un lysat cellulaire mais pour l'éliminer totalement du lysat cellulaire. Je possède un anticorps spécifique de cette protéine. Quelqu'un sait-il si ce que j'envisage est possible, ou restera-t-il forcément de la protéine dans le lysat quoique je fasse.  [...] Il restera forcément un peu de protéine surtout si l'anticorps est de mauvaise qualité. Il faudra quantifier pour voir si ce qui reste peut gener ou non.  [...]

La goutte

Toujours est-il que ces cristaux d'urate entraîne un appel leucocytaire au lieu de saturation, puis une endocytose des cristaux par ces leucocytes. Comme lors de toute phagocytose, les cristaux sont intégrés dans des phagolysosomes intracellulaires, contenant des enzymes destinées à les dégrader.  [...] Cependant, ces enzymes en sont incapables. Il y a alors explosion de la cellule et relargage du contenu. les cristaux se surajoutent aux autres, le contenu cellulaire fait baisser le pH du sang induisant l'augmentation de la précipitation d'autres cristaux (car l'acide urique est 20 fois moins soluble que l'urate), avec en plus la dissémination des enzymes (protéases, élastases, hydrolases...) dans le sang.  [...]

[Biochimie] western surnageant culture

je souhaiterais avoir des renseignements afin de détecter par western blot une protéine contenue dans le milieu de culture de cellules. Faut-il concentrer (précipitation, ultracentri, chromato,...) les protéines présentes dans le surnageant de la culture Comment procéder.  [...] Sinon sur ce forum, Gorben parle souvent d'une précipitation au TCA qui permet de concentrer les protéines. Ca devrait aussi pouvoir vous intéresser.  [...]

[Biochimie] Activité enzymatique

Donc tu fais une precipitation au Sulfate d'ammo, c'est quoi en détail ton protocole Peux tu doser la quantité de protéine avant et après precipitation Tes conditions expérimentales de mesure de cinétique sont elles identiques avant et après précipitation.  [...] Il faudrai également savoir, si la précipitation n'endommage pas la protéine et donc si il n'y a pas une perte d'activité catalytique. Pour cela il faudrai determiner l'activité spécifique, avant et après précipitation.  [...]

[Biochimie] purification protéine

Je travaille sur la purification de protéines. Lorsque l'on effectue la précipitation par le sulfate d'ammonium, on récupère bien le culot (on cherche donc à faire précipiter notre protéine d'intérêt alors que j'ai écrit l'inverse dans mon cours). J'ai un petit doute.  [...] l'addition du Sulfate d'ammonium à forte concentration diminue la quantité d'eau disponible pour solvater les protéines.Ces dernières vont se précipiter.  [...]

précipitation proteine

J'ai vu dans bcp de papier, que pour purifier une RNA polymerase, il fallait aprés lyse des cellules faire une précipitation à la polymin-P suivie d'une précipitation au sulfate d'amonium. Je me suis un peu renseigné et la polymin-P (Polyethylenimine) me semble surtout capable de precipiter les ADNs.  [...] a ceux que ca interesse, la polymin-P permet de detruire les membranes des gram-. Elle permet aussi de precipiter les ADNs et tout ce qui est fixé dessus et donc dans mon cas, la RNA pol vu qu'elle n'existe pas ou trés peu libre dans la cellule.  [...]

Bactéries et industrie | Dossier

Certaines bactéries fabriquent du carbonate de calcium, ce processus est appelé carbonatogenèse. La première précipitation dite passive utilise les voies métaboliques. ammonification des acides aminés, réductions diverses- nitrates, sulfates. On obtient du carbonate dissous dans la cellule puis intervient le phénomène de précipitation dite active qui sembe mettre en jeu des processus essentiellement membranaires.  [...] En étudiant ceci à des fins précises de restauration les chercheurs ont mis au point un traitement de la pierre qui consiste à favoriser le développement d'une mince couche de biocalcaire protecteur. A partir de 1990, tout un programme d'études visant à optimiser et à industrialiser le procédé a été mis en place.  [...]

Précipitation protéines au sulfate d'ammonium

Ma protéine a été exprimée chez S. cerevisiae. Les cellules vont être lysées mécaniquement. Puis une première étape de précipitation va être réalisée à l'aide du sulfate de protamine (stock à 3% w/v pour être à 0,07% final) pour je suppose éliminer les acides nucléiques,  [...] .. Après une étape de centrifugation, ma protéine va être précipité entre 35 et 45 % de sulfate d'ammonium (100%) puis on réalise une nouvelle étape de centrifugation et le culot est resolubilisé.  [...]

précipitation des protéines

en fait la précipitation des protéines arrive lorsqu'il y a une faible solubilité de la protéine dans la solution. En concentration faible de sels dissouts dans la solution, (donc faible force ionique) les sels interagissent avec les radicaux des protéines et aident à leur dissolution, or qu'en forte concentration saline, tout change, en effet, il n'y a plus assez de éluant (pris par les sels) donc les protéines se regroupent, on dit qu'elles précipitent (relargage).  [...] ceci dit, la concentration en sel qui mène à la précipitation d'une certaine protéine n'est pas forcement la même pour une autre.  [...]