• Santé - Cassette, Sélection, Cellules

Carte plasmide pcDNA 3.1

La cassette de sélection néo peut etre utilisée pour sélectionner des cellules eucaryotes, du coup pour que le messager fonctionne il faut qu'il soit polyadenylé (d'ou le sv40pA).  [...] SV40ori sert d'origine de réplication dans certaines cellules eucaryotes, c'est-à-dire que si on l'insert dans E.coli il ne va pas s'exprimer Mais si le plasmide doit se répliquer dans une bactérie la réplication va commencer à pUCori ou f1ori Je ne comprends pas pourquoi il y a plusieurs origines.  [...]

Mutagenèse dirigée : un Nobel pour des souris mutantes

La nouveauté aura été de réussir à introduire le gène muté par génie génétique dans la cellule et à sélectionner les cellules ayant vécu cet événement extrêmement rare de recombinaison homologue. Un peu plus tard, en 1987, Capecchi parvenait à muter le locus Hprt dans les fameuses cellules souches de Evans par la technique de mutagénèse par recombinaison homologue développée par Smithies.  [...] La construction des fragments d'ADN injectés dans la cellule a alors été pensée pour permettre une sélection en deux temps. En plus du gène muté, on ajoute un gène de résistance à un antibiotique (appelé cassette NEO, il confère une résistance à la néomycine), ainsi qu'une cassette TK (TK pour thymidine kinase, confère une sensibilité au gancyclovir).  [...]

Un cerveau de drosophile en multicouleurs !

Vert, jaune, violet, rouge, bleu... Toutes ces couleurs à priori absentes des cerveaux des animaux se retrouvent aujourd'hui mélangées dans les 100.000 neurones du cerveau de drosophile, formant un tableau digne d'un peintre contemporain. Loin d'être dénuée de tout intérêt scientifique, cette technique permet de déterminer le rôle de chacune de ces cellules.  [...] D'un autre côté, une équipe du National Institute for Medical Research à Londres, a également développé une technique, Flybow, permettant l'expression aléatoire des protéines colorées en fonction des cellules. Deux paires de gènes sont chacune sur une cassette d' ADN, qui peut se retourner ou être éliminée grâce à l'activité d'une autre recombinase (Flp-FRT).  [...]

mutagénèse classique

pardon, je réalise maintenant ma bêtise...oups. je ne fais que sélectionner dans ce cas les souches ayant bien reçu la seconde cassette et non les souches sensibles à la kan.  [...] Dans certains cas, des bacteries de labo ont été modifiée genetiquement et une cassette de resistance Kan a été integré dans un gene. Pour faire sauter cette cassette, tu peux soit selectionner sur un phenotype KanS soit sur le phenotype restauré du gene interrompu.  [...]

[Biologie Moléculaire] No hablo ingles or just a little

Alors je ne suis pas certain (j'ai pas lu l'article en detail) mais ma version c'est que la cassette est juste un fragment d'ADN que tu peux inserer dans le chromosome, conferant une resistance Sm/Spc. Dans ton article, ils s'en servent pour faire des mutants selectionables.  [...] tortuga. Alors je ne suis pas certain (j'ai pas lu l'article en detail) mais ma version c'est que la cassette est juste un fragment d'ADN que tu peux inserer dans le chromosome, conferant une resistance Sm/Spc. Dans ton article, ils s'en servent pour faire des mutants selectionables.  [...]

Screening avec librairie d'ARNg + cas9

On réalise une expérience de screening. Des clones de cellules cancéreuses ont été modifiés pour exprimer Cas9, on transfecte ensuite dans ces mêmes cellules une librarie d'ARNguide dans un vector lentivirus. On sélectionne ces cellules cancéreuses avec soit des Lymphocytes T qui attaquent spécifiquement ces cellules cancéreuses (Ltx) soit des Lymphocytes T non spécifique (contrôle (Ltc)).  [...] En fait ce n'est pas l'ARNg qui est directement transduit mais un lentivirus contenant une cassette d'expression de cet ARNg. Les lentivirus étant des rétrovirus, la cassette d'expression de l'ARNg sera incorporé au génome de la cellule ce qui permettra la production de cet ARNg.  [...]

Petites questions de biologie !

Oui et non... Oui parce qu'en théorie les cellules tumorales sont clonales donc elles possèdent toutes les mêmes anomalies. Et non parce que l'on sait qu'il existe des phénomènes de co-évolution entre la tumeur et l'organisme. les cellules tumorales sont capables de s'adapter notamment à différents traitements anticancéreux, d'échapper au système immunitaire, etc.  [...] La protéine concernée est la P-gp (P-glycoprotéine) qui est une protéine de la famille des transporteurs ABC (ATP Binding Cassette) impliquée dans ce qu'on appelle le phénotype MDR (Multi Drug Resistance). Cette protéine est une pompe qui permet dans certains cas aux tumeurs de résister aux chimiothérapies en rejetant les anticancéreux en dehors de la cellule.  [...]

[Immunologie] teste de grossesse immunologique

Le principe du test de grossesse immunologique, c'est la coloration d'une petite bande de textile faisant apparaitre un + pour positif ou alors un - pour negatif, par la reconnaissance des recepteurs alpha des antigènes aux anticorps, qui se colorent pour former la bande verticale du +.   [...] -. Cepandant, comme dans tout les cas, la bande de textile se colore en + ou -, es-ce qu 'il y a deja des antigenes présents dans le texte immunologique.   [...]

[Biochimie] Clonage après purification sur gel

J'ai une petite idée qui vaudra ce qu'elle vaudra. Pour enlever ta cassette de résistance, as-tu pensé à amplifier ton vecteur par PCR en prenant des amorces qui excluent la cassette de résistance (et qui incluent en 5' de tes amorces les sites de restriction plus quelques bases en 5' de chaque site de restriction pour pouvoir les cliver par la suite) Si ton vecteur provient de bactéries, il sera méthylé.  [...] Ainsi, seul ton vecteur d'origine (celui contenant ta cassette) sera digéré par cette enzyme, et pas ton produit de PCR, ce qui te permet de bien te débarrasser de ta cassette.Cela pourrait être une stratégie de rechange par rapport à ta stratégie actuelle qui est de simplement extraire la cassette avec des enzymes de restriction correspondant à ton futur site d'insertion.  [...]

Mutagenèse saturante

Pour précision, quand tu fais une muta saturante, le terme saturant signifie simplement que tu es sur d'avoir muté au moins une fois chaque gene. Alors attention ces mutations sont presentent dans des cellules differentes. C'est une population de cellules a qui tu fais subir la mutagenese.  [...] Donc il te faut calculer le nombre de cellules necessaire pour etre exhaustif (en fonction de la taille du genome, de l'efficacité de mutagenese etc..) en general on estime que si tu as 3 fois la taille du genome en cellules mutantes tu as statistiquement tous les genes mutés.  [...]