• Santé - Carte, Restriction, Digestion

[Biologie Moléculaire] Carte de restriction électrophorèse

J'ai réalisée une digestion d'un plasmide bactérien inconnu afin de déterminer sa carte de restriction. Pour cela, je l'ai digéré avec des enzymes de restriction. BamHI et EcoRI. J'ai fait une digestion avec chacune des enzymes tampon E pour BamHI et tampon MC pour EcoRI et une avec les 2 dans le tampon MC (activité 75% pour bamhI et 100 pour ecorI).  [...] En supposant que dans la double digestion mes 2 enzymes aient coupé au même endroit, je pense pouvoir multiplier 3090 par 2 soit 6180 pb pour la double digestion ce qui serait cohérent avec les autres résultats. Mais je ne comprends toujours par le résultat de cette double digestion, car selon moi j'aurais du obtenir les mêmes résultats que la digestion EcoRI sinon je ne peux pas trouver la carte de restriction de mon plasmide.  [...]

[L1 BIO] TP Biologie moléculaire

Puis après on décide de faire une carte de restriction,en faisant une digestion enzymatique par l'enzyme de restriction xho1,cette enzyme se trouve de base dans le plasmide recombinant et aussi dans la séquence de l'ADN de la GFP mais pas dans celui de la Dsred.  [...] La carte, c'est l'interprétation que tu en fais, c'est-à-dire la disposition des différents sites de restrictions sur ton plasmide avec la distance séparant chacun des sites que tu as placé.  [...]

Confirmation de l'insertion d'un gène dans un plasmide

Je travaille actuellement sur un clone et je veux savoir s'il est possible de confirmer une ligation entre un gène et un vecteur plasmidique et par quelle méthode puis¬je la faire.   [...] Oui c'est toujours comme cela que l'on fait d'ailleurs. On établit la carte de restriction du plasmide en utilisant des enzymes de restriction. A minima, une enzyme de restriction qui ne coupe qu'une fois permettra de linéariser le vecteur et d'en trouver la taille en faisant migrer le produit de digestion dans un gel d'agarose.  [...]

microbiologie - CARTE DE RESTRICTION

Voilà, je n'ai jamais suivi de cours de bio depuis le lycée, et mon prof me demande de faire une carte de restriction sans m'expliquer ce qu'était le phénomène. une digestion de restriction, un adn plasmidique circulaire, bref j'ai dû mal à me représenter de quoi il s'agit.  [...] ps. je te conseillerai plutot de faire une carte de restriction linéaire afin de bien juxtaposer les fragments qui ont été coupés ou non dans la double digestion.  [...]

Carte de restriction

Bonsoir, je n'arrive vraiment pas à comprendre la notion de carte de restriction, en fait il y a un exemple particulier qui me tracasse, disons que nous avons une portion d'ADN à étudier et que nous avons deux cas deux figures qui se présentent soit la formation soit l'abolition d'un site de restriction et nous allons faire une double digestion avec deux enzymes.  [...] Disons que l'enz 1 coupe aux deux extremités et le site de restriction sur lequel va agir une enz2 soit formé soit aboli va se trouver au milieu, d'apres ce que j'ai compris, si le site est aboli= pas de coupure au milieu par l'enz2 et nous aurons juste les coupures aux extremités par l'enz1 ce qui va former un seul fragment, maintenant si on l'hybride avec une sonde, qui s'hybride avec la partie vers le milieu de le séquence on aura logiquement un seul trait dans l'electrophorse non vu que la sonde va s'hybrider avec le fragment.  [...]

enzyme de restriction BamH1

En labo, je fais digérer un plasmide pcDNA3.1(+)par l'enzyme de restriction BanH1,  [...] Oui en principe la position du mot BamHI sur une carte de restriction indique le lien où BamHI est censée coupée. Possible que l'on vous ait parlé d'EcoRI dans le cadre d'une double digestion EcoRI ET BamHI.  [...]

[Biologie Moléculaire] Où puuis-je trouver la carte de restriction d'un plamide?

[Biologie Moléculaire] Où puuis-je trouver la carte de restriction d'un plamide.  [...] j'ai fait un TP de biologie moléculaire avec le plamide pUC18 et une question porte sur l'etablissement de la carte de restriction du plasmide a partir de digestion enzymatique faite sur celui ci.  [...]

Plasmide recombinant

J'ai un petit problème en génétique, alors dans plusieurs exercices on me demande de faire la carte de restriction d'un plasmide, suite une simple et ensuite une double digestion, là c'est bon, mais après quand on me dit qu'on hybride le plasmide recombiné après la double digestion avec une sonde formée par l'ADN copie, alors ici j'arrive même pas à comprendre d'ou provient cet ADN copie, autrement dit il est la copie de quel ARNm au juste et puis on me donne la taille des fragments obtenus (après hybridation) et on demande de trouver la taille du fragment et ou il est placé.  [...] Après ligation de ton plasmide, si tu le redigères, les fragments générés ne sont plus les mêmes qu'au départ. Tu as perdu un bout de plasmide, celui qui se trouvait entre les deux sites de restriction utilisés à la base, et ça a été remplacé par ton insert.  [...]

Carte de restriction de Pcr-GAI

Notre TP consistait à récupérer la moitié 5' du gène GAI puis de l'insérer dans un autre plasmide. Pour vérifier si le plasmide recombinant est le bon, il est nécessaire d'améliorer la carte de restriction du plasmide Pcr-GAI en trouvant le site de restriction de XhoI et celui de BglII sur le gène GAI.  [...] Bon apparemment on dispose de BamHI donc dans ce cas on peut libérer le 5' GAI en utilisant HindIII et BamHI et ensuite le faire digérer séparément par XhoI et BglII si on obtient deux fragments par digestion, on a les deux sites de restriction sur le 5' GAI (donc dépend d'un coup de chance) sinon il faut (pour améliorer la carte de restriction) obligatoirement isoler le 3'GAI avec EcoRI et HindIII et le mettre en contact avec l'enzyme dont on cherche encore le site de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse

-. Je ne sais pas trop comment on peut procéder puisque je n'arrive pas à comprendre comment on a obtenu la carte de restriction de l'ADN 2.  [...] J'ai donc réussi à tout faire sauf la carte de restriction de l'ADN 1 car je ne sais pas comment représenter le décalage (la substitution).  [...]