• Santé - Bruit, Marquage, Anticorps

[Divers] Définition

Dans le cas d'un ELISA, le bruit de fond peut être représenté par exemple par le marquage non spécifique.  [...] Bah on est tous d'accord pour le bruit de fond causé par un marquage aspécifique des anticorps.  [...]

[Biotechnologie] bruit de fond et cytométrie

Quand on fait un marquage en cytométrie, on met généralement, un excès d'anticorps. Si tu laves insuffisament, il va rester des anticorps en solution (non fixés aux cellules ou particules) qui vont augmenter le bruit de fond.  [...] Juste pour info, quand tu fais un marquage en cytométrie, il faut toujours faire un contrôle négatif. Ce contrôle mesure le bruit de fond (fixation non spécifique, excès d'Ac, ect). C'est par rapport à ce contrôle que tu peux dire si un marquage est positif ou non.  [...]

Immunohistochimie

Je suis nouvelle dans ce forum, je suis doctorante en biologie humaine. J'essaie desespérement depuis quelques jours de faire un marquage immunohistochimique du récepteur opioide mu sur du tissus de colon de rat.  [...] Mais bon j'ai sois un trop faible marquage limite douteux soit trop de bruit de fond. Je ne sais plus quoi faire (passage des lames au microonde, utilisation d'un diluant dako pour l'anticorps primaire etc).  [...]

Immunohistochimie

Après, pour avoir des protocoles précis, il faut voir les fabricants d'anticorps, d'automates et les adapter au désidératas du lecteur... Mais dans les contexte actuel avec les velléités d'accréditation, je suis convaincu qu''il ne faut pas chercher à jouer les apprenti sorcier et se fier au fabricants qui sont eux certifiés IVD et surtout de proscrire les techniques manuelles (à regret...).  [...] Les solutions, maîtriser la fixation (temps notamment...), utiliser des protéases, pour info, la prière n'est pas efficace. Les bruits de fonds viennent ensuite, (avec les anticorps commerciaux on peux espérer l'absence de marquage on spécifique) on peut alors agir sur la concentration en anticorps, le temps d'incubation et les rinçages.  [...]

[Méthode d'étude] Immunochimie : Etape de contrôle.

En gros, chaque anticorps peut se fixer sur la cible attendue (c'est que l'on appelle un marquage spécifique) et/ou sur des cibles inattendues (c'est que l'on appelle un marquage aspécifique). En général, l'affinité de l'anticorps est largement supérieure pour sa cible (il est fait pour reconnaitre cette cible) que pour ses sites de fixation aspécifique.  [...] L'anticorps secondaire suit les mêmes règles. Il est conçu pour se fixer sur l'anticorps primaire mais peut se fixer aussi ailleurs. Un bon moyen de vérifier cela est d'incuber une préparation avec uniquement l'anticorps secondaire. On observe alors uniquement le marquage aspécifique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marquage immuno histo enlever le bruit :o((

Voilà, sur des coupes de muscles de souris, on a fait des marquages fluo des fibres (b-dg sur kit MOM). Le soucis c'est que je dois me compter des milliers de fibres à la main car j'ai un bruit de fond horrible qui empèche le logiciel de faire correctement son travail (Morpho expert).  [...] Le bruit que tu as est certainement du à un interférent, ou à un point critique de ton marquage qui n'est pas maitrisé. C'est souvent sur la préparation de coupe et non sur le marquage lui même que les points critiques sont à surveiller particulièrement.  [...]

[Biologie Cellulaire] Immunofluorescence

Pourquoi voulez vous faire le couplage vous même On trouve des anticorps commerciaux déjà couplés. Pour le choix du fluorochrome c'est à vous devoir avec les filtres dont vous disposez. Chez nous, par exemple, on utilise souvent Cy3 en première intention.  [...] L'anticorps secondaire pourra être un anticorps de lapin conjugué à la fluorescéine (marquage vert) ou à la rhodamine (marquage rouge ou rose) et dirigé contre les IgG de souris par exemple (si l'anticorps primaire est un anticorps de type IgG produit par la souris et dirigé contre une protéine du cytosquelette comme l'actine).  [...]

[Journal club] Extinction de l'expression de gènes par les siRNA : la découverte

La figure concernée ne montre que le résultat obtenu avec le siRNA Lamine A/C où on voit une forte diminution du marquage cellulaire par l'anticorps anti-Lamine A/C sans affecter le marquage par l'anticorps anti-NuMa. Ce résultat est confirmé par western blot pour les lamines A et C.  [...] D'ailleurs, en in situ on a régulièrement à faire à du bruit de fond, résultat d'hybridations aspécifiques. Qu'en est il pour l'interférence ARN Comment établir la spécificité de la réaction.  [...]

[Immunologie] comment doser une proteine ?

-marquage par anticorps dirigés contre tes protéines, avec des anticorps contenant une séquence d'affinité ( affinity tag, je sais pas comment le dire en français).  [...] mais ça ne marcherai que si tu as une concentration suffisamment grande à la base, ce qui n'est surement pas le cas avec des virus.   [...]

[Biologie Cellulaire] Immunomarquage VEGF chez le porc

[Biologie Cellulaire] Immunomarquage VEGF chez le porc.  [...] je souhaite étudier l'angiogénèse dans un modèle chez le porc. Je voudrais réaliser des colorations par immunohistochimie avec un anticorps anti-VEGF. Pour valider mon marquage, quel tissu ou modèle pourrais-je utiliser pour avoir un contrôle positif de ce marquage.  [...]