• Santé - Blocage, Sites, Western

[Biologie Moléculaire] Western blot

J'ai une question qui va sans doute paraître naïve mais tant pis alors la voilà. Dans un Western blot par exemple, il y a une étape après l'électrophorèse dite de blocage qui consiste à saturer (souvent avec de la caséine ou du BSA) les sites non spécifiques, ce que je comprends bien dans le principe.  [...] Elle se fixe aussi sur les sites spécifiques, mais l'anticorps a une affinité plus grand pour ces sites et déplace donc la protéine aspécifique pour s'y fixer. Ce qui n'est pas (moins) le cas avec le sites aspécifiques.  [...]

[Biochimie] La BSA

La BSA est principalement utilisée soit pour bloquer les sites aspecifiques sur les membranes lors des western-blot, et comme stabilisateur dans les réactions enzymatiques.  [...] La BSA est utilisée, comme dit Yoyo, pour le blocage des sites aspécifiques lors du Western, aussi pour faire des gammes étalon lors de certains dosages (Bradford), aussi je l'ai utilisée pour diminuer mon bruit de fond lors d'hybridation sur microarray, parfois elle peut être aussi utilisée en tant que témoin de charge (dans des gels).  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique du Western Blot

Plus précisément il faut saturer les sites de fixation non spécifiques des anticorps, pour éviter d'avoir trop de bruit de fond et plus important, d'avoir du signal non spécifique. C'est globalement le même principe que pour les étapes de blocage en immunohisto.  [...] Le blocage des sites de fixation non spécifique des anticorps aux protéines que tu as transféré sur la membrane peut aussi se faire si nécessaire mais c'est différent.  [...]

[Immunologie] protocole immuno-histo-chimique

c'est la révélation. ton anticorps secondaire est couplé a une peroxydase, qui transforme le DAB en un produit coloré, donc localisé la ou Ki67 se trouve (d'ou l'intéret d'inactiver les perox. qui trainent un peu partout).   [...] oui je comprends bien mais il faut bien deshydrater au début pour faire les coupes (sauf si autre chose que de la paraffine), sinon pour le montage oui je comprends tout a fait.   [...]

Cycle de Krebs

mais j'aimerais bien savoir comment est il possible que des molécules puissent avoir un effets pendant toute la vie d'un homme Elles restent ad vitam eternam dans le métabolisme ces molécules.   [...] ...j'aimerais bien savoir comment est il possible que des molécules puissent avoir un effets pendant toute la vie d'un homme Elles restent ad vitam eternam dans le métabolisme ces molécules.   [...]

[Biologie Moléculaire] western blot/azide?

pendant l'étape de blocage de Western Blot on utilise le lait (écremé) pour éviter les bruit du fond mais aussi de l'azide à 0.01%.  [...] Il me semble que la réponse à t'as question est assez simple. tous simplement parce que on ne conserve pas la dilution de l'anticorps secondaire.   [...]

[Biologie Cellulaire] PBS ou TBS

Dans le 1er cas nous avons bloquer les sites spécifiques avec dans du tampon TBS (plus lait bien sur) alors que pour l'immunocytochimie, il y avait toujours le lait mais la solution tampon était du PBS.  [...] autre petite question. est que vous savez pourquoi le tampon de blocage contenait du Triton (solvant dont je connais le role ) pour l'ICC et pas pour le western.  [...]

[Biochimie] Contrôle d'inhibition de la dégradation lysosomale

J'inhibe la dégradation par les lysosomes (avec plusieurs concentrations de leupeptine) et j'aimerai trouver un contrôle positif de mon blocage c'est à dire une protéine qui s'accumule sous leupeptine en western.  [...] Déjà je pense que les protéines cytoplasmiques ne fournissent pas le meilleur groupe de protéines dégradées par cette voie, étant je pense dégradées principalement via le protéasome. Sinon je t'aurais dis les protéines anti-apoptotiques, fortement traduites mais aussi fortement dégradées.   [...]

vaccin

Mais il faut que le site de liaison soit le bon, c'est un peu comme un mastermind, le lymphocyte B change tout le temps sa combinaison justement pour avoir le plus de chance de trouver la bonne au bon moment.  [...] Si le contact est fait, alors le Lymphocyte B crée des anticorps, petites protéines qui reconnaissent spécifiquement les antigènes des intrus et les empêche de faire leur travail contre nous (blocage de tous les sites du virus, précipitation, agglutination, etc...).  [...]

Bruit de fond lors d'un southern

Moi j'aurai tendance a dire que soit c'est la préhybridation qui n'a pas ete efficace (donc beaucoup de bruit de fond. si le blocage des sites aspecifiques n'est pas efficace), ou alors la sonde utilisée est trop concentrée ce qui entraine des hybridations aspecifiques.  [...] Sinon la derniere possibilité est que les lavages n'ont pas été effectués a une temperature suffisament elevée ou a des concentrations salines suffisament fortes.   [...]